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问
WB两张膜,为什么差别这么大
天一湖医者
可能是操作过程中有问题(可能原因是(1)、你结合底物会不会有问题,即没有充分结合好,或者结合时间太短,(2)、你要确定两张膜都是用新的底物反应液,(3)、就是没有信号的膜会不会压片时间太短,如果使用仪器扫片就不存在这种问题,)所以原因比较多,你只能逐一排查。
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问
Southern Blot电转法
天一湖医者
操作方法 1. 在琼脂糖凝胶上电泳分离DNA。取出凝胶,切去边缘多于部分,EB染色,在紫外灯下照相(放一标尺,可从像片中读出DNA迁移的距离)。 2. 将凝胶置于200mL变性液中,浸泡45分钟,并温和地不断振荡,使凝胶上的ds-DNA转变为ss-DNA,然后用重蒸水冲洗凝胶几次。 3. 用中和液浸泡凝胶并不断地振荡45分钟,将凝胶中和至中性。防止凝胶的碱性破坏硝酸纤维膜。 4. 取一个瓷盘,在底
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问
求助:H1975细胞是否染菌
天一湖医者
刚飘起来不久的细胞并不就是死细胞啊。只不过是亚健康状态而已,只要有足够的条件,还是能恢复的。
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问
请教请教!请问酵母可以做细胞爬片吗?万分感谢!
天一湖医者
可以,酵母是可以做细胞爬片的。
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问
滑膜组织取材
天一湖医者
大鼠膝关节滑膜组织的图片,是需要这样的吗?
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问
求助:裸鼠长毛以及皮肤角质增厚
bamboopiggy
你买的裸鼠状态确实不好了,可能这家公司的裸鼠都这样,你最好换一家公司订。
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问
低温条件下,nadh验证酶活时,340nm的nadh吸光值先下降再上升是为什么?
天一湖医者
在波长为340nm处随着NADH的氧化, NADH吸光度下降。
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问
请问大佬们有没有遇到过质粒转入293t中表达,但目的细胞不表达的情况?
bamboopiggy
1.用慢病毒感染293T再是一下,如果还有表达那只能说明你的目的细胞对这套系统不合适。2.可能你的细胞本身对这个筛选的抗生素抵抗,所以你筛不到目的细胞,导致wb显不出来。
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问
转膜液的配方中加甲醇的作用是什么?
Eason老歌迷
有几个原因,一个是可以降低电导,减少转膜时候的发热。二甲醇可以使sds和蛋白分离。
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问
即使两次的上样量相同,但是内参却不一样,是为什么?上样过程都是一样的
bamboopiggy
其实你觉得你上的一样,还是有误差的,只要趋势一致,或者是比值差不多就可以了。当然还有一种情况就是蛋白降解了。
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问
WB结果中其它条带均正常,只有其中一个条带出现变形,请问这一般是由什么导致的呀?
dxy_x0eq0ed
是不是胶没配好,配胶刚好那一块不均匀,所以就变形了。
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问
细胞传代最多可以传多少代?
府宅
一个人的一个细胞分裂次数有限,大约50到60次左右在动物细胞体外培养过程中细胞在培养到40-50代时,细胞的分裂速度会明显减缓,甚至完全停止。
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问
细胞为什么会出现老化现象
dxy_gwrp7ndq
1. 不要等细胞长得太满才传代。细胞太密会导致细胞状态下降,产生细胞接触性抑制。2. 细胞不要消化过度。采用胰蛋白酶消化细胞,会造成细胞表面一定程度的细胞损伤。3. 最重要的是使用优质的血清和培养基
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问
求助 Collagenase A 是几型胶原酶?
府宅
Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型以及肝细胞专用胶原酶,是按照胶原酶消化的组织类型分类的,应该是属于单一成分。A、B、D、P、H型,是按照罗氏胶原酶产品分类的,应该是属于混合成分。
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问
大鼠踝关节滑膜怎么取?
ZIWENHUA
将大鼠浸泡于10 %强力消毒冷溶液中10 分钟, 在超净工作台, 仰位固定,常规碘酒、酒精消毒术野。沿膝关节正中纵行切开皮肤直至暴露出以膝关节为中心约3cm ×3cm 的区域, 以有齿镊提起髌骨。沿髌骨上缘约013 ~014cm 处向下切割直至股骨, 再分别沿髌骨两侧向下分离至胫骨, 此时即打开了膝关节腔, 可见由髌骨下缘向上延缓有一层平滑光亮呈淡黄色的滑膜组织。完整剥离滑膜组织, 最后以眼科镊轻
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问
求助:AHRQ横断面研究质量评价条目解读
天一湖医者
Meta分析系列之四:观察性研究的质量评价工具》中找到了翻译的版本:1是否明确了资料的来源(调查,文献回顾)2是否列出了暴露组和非暴露组(病例和对照)的纳入及排除标准或参考以往的出版物?3是否给出了鉴别患者的时间阶段?4如果不是人群来源的话,研究对象是否连续?5评价者的主观因素是否掩盖了研究对象其他方面情况?6描述了任何为保证质量而进行的评估(如对主要结局指标的检测/再检测)7解释了排除分析的任何
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问
WB条带的背景
秋秋欣欣
可能是你没封闭后,一抗可以用奶粉直接稀释抗体,洗膜的时候可以多洗几次,水换勤一些
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问
Raw诱导破骨细胞不成功
天一湖医者
你可以试试更换RANKL,换成RD的。
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问
rip对照实验的设计
天雨心晴
敲低,原始,和空载三个都要做。
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问
结直肠癌转染
秋秋欣欣
220-300V都可以,或者就用脂质体转染
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