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问
谷氨酸棒杆菌电转,每个电击杯加多少质粒和菌液呢?
府宅
转化时一般200ul感受态细胞悬液 中加入的质粒含量不超过50ng,体积不超过10ul。将40~100ul解冻的感受态细胞转移电击杯
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问
外泌体研究
dxy_gwrp7ndq
可使用洗涤剂处理和超声波替代电穿孔方式
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问
关于Naive CD4+T的活化增殖
天一湖医者
CD3不超过50ng/ml,CD28不超过30ng/ml。
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问
拥挤棒状杆菌感染抗生素如何选择?
dxy_gwrp7ndq
应根据药敏实验选择相应抗生素控制感染
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问
Pcrtargeting切除抗生素是电转进Bt340后在37度完成筛选吗?然后在42度过夜诱导吗
府宅
37度培养筛选,42度热击90秒
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问
胶体金释放不完全问题
天一湖医者
可能是因为你的胶体金的颗粒大小的选择和最佳抗体标记量的选择上出了问题,这是多方面的因素导致的,你得先固定一个影响因子来调另一个因子,这样反复实验看看效果。
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问
求助hepG2炎症模型建立
汤姆卜丽波
做过诱导巨噬细胞的,有很多文章都涉及到LPS刺激或者影响hepG2炎症因子分泌的,你可以看看参考一下
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问
广集讨论
秋秋欣欣
QRICH1是UPR中PERK-eIF2a通路的关键效应因子,是细胞进入内质网应激终末端的主要决定因素。
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问
求助,wb糊成一片
府宅
样品量太大了,不论是胶还是膜,承受能力都有限度,这样跑胶蛋白会连成一条线,转膜时候,单位面积的膜能hold的蛋白量是一定的,相同分子量的蛋白太多,目的蛋白的转膜效率可能很受干扰,倒是建议你0.2的PVDF,降低蛋白上样量,提高一抗浓度
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问
植物CP蛋白的单抗感觉特异性不是很强,能跑出来很多带,请问这是正常现象吗,如何解决?
dxy_gwrp7ndq
如果实在没有更好的抗体,建议采用阴性对照和阳性对照来确定上述哪个条带是目的条带。
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问
如何提高circRNA的成环效率
天一湖医者
由于circRNA本身就能环化,所以将circRNA两侧的内含子序列充当环化臂进行构建;另外,也可以取一侧内含子序列1kb,另一 侧构建互补序列充当环化臂,最后检测circRNA的过表达效率,取最佳构建方式。
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问
实时定量PCR进行比较时,需要进行统计吗?如何进行统计学分析?
秋秋欣欣
需要进行统计分析的,计算样本的平均±SD,CV
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问
ELISA实验结果出现不在线性范围,高可以稀释样品,低的要怎么弄呢?对比OD值,结果能认吗?
汤姆卜丽波
可以搞个再灵敏一点的试剂盒测试一下
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问
input可以做出来,IP一直拉不下来是什么原因
汤姆卜丽波
是不是抗体用的不对,或者两个蛋白之间互作不大
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问
纳米材料加入真菌培养基后易被析出。
天一湖医者
纳米抗菌材料与真菌接触后会诱导其细胞产生氧化应激反应,从而使真菌的细胞结构和脂质、蛋白质和DNA等成分被氧化破坏。有些情况下纳米抗菌材料也会使真菌细胞内部产生超氧阴离子自由基、羟基自由基、过氧化氢和单线态分子氧等活性氧物种,这些物质的过度累积会造成细胞的凋亡。
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问
培养真菌所用PDA培养基调整ph值后很难凝固,求助
天一湖医者
降低pH值造成培养基酸解,因此不易凝固
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问
自带发光基团的抗体都会串光吗?实验室买的PH3就会串光,只能避开串光的波长来做实验
balalaLy
串光的话可以根据共染的几个荧光光谱适当缩小一下
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问
冷冻切片一般厚度是多少,多大厚度不影响染荧光抗体呢
balalaLy
看你的是什么组织。切片的厚度一般都是越薄越好,像脑组织可以切到6um左右就挺不错了。但是有些组织太薄了一方面不容易切,另一方面可能观察不到某些结果
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问
抽提完的质粒,有什么办法去内毒素吗?
天一湖医者
使用过滤中性的细菌裂解液,并加入专门的不含内毒素缓冲液(缓冲液ER)在冰上进行共同孵育。不含内毒素缓冲液能够避免LPS分子与树脂结合,从而使每微克质粒DNA中含有的内毒素少于0.1EU。
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问
外泌体纯化超速离心,亲和纯化,微流控,粒径排阻色谱
Omiget12
本人用过一款试剂盒,方法简单,提的外泌体也比较纯
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