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问
WB背景有竖纹,该如何解决
Eason老歌迷
想问一下,你是1.0的板还是1.5的板,厚胶容易发生。还有你这是条带笑脸,说明凝胶不均匀冷却,或者是电泳系统温度偏高。
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问
受体和通路的关系
Eason老歌迷
我举个例子吧,同一神经递质,在神经系统的不同部位会表现出不同的兴奋和抑制效应。只要是突触后膜上受体类型不同。受体不同,通路的效应也不同
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问
诱导过程中,菌体碎屑
Eason老歌迷
你有没有在超净台上操作,是不是有杂菌。然后可能是噬菌体感染。
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问
M17细胞内出现很多透亮的小圆点
Eason老歌迷
可能是细胞生长过老,破碎的细胞残骸。血清质量不好,反复冻融的结果。配制培养基的PH值偏高,不宜细胞生长。
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问
关于WB实验跑带问题?
天一湖医者
问题出在每一步都有一定的可能性,比如电泳,转膜,敷抗体,显色等等
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问
蛋白筛选
Eason老歌迷
wnt信号通路是一个复杂的蛋白质作用网络。wnt配体可与卷曲蛋白相互作用,导致各种细胞内信号传导级联激活,这些信号传导级联又可以交叉连接或独立发挥作用,调节多种多样的生化过程。wnt3a是wnt/β-catenin经典途径中的主要配体。当存在wnt3a配体时,其会与细胞膜上的受体fzd结合激活wnt信号通路,导致β-catenin去磷酸化,使得β-catenin在细胞质中富集并转移至细胞核内,与t
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问
wb黑糊糊一片,是怎么回事呀?湿转,300mA 100min,分子量110kD左右。
秋秋欣欣
除了封闭外,发光液配置时间过长同样会引起发光效果不好,背景脏或者漆黑一片。
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问
磷酸化蛋白免疫印记实验
天雨心晴
时间长点,一般问题不大,主要是抗体的浓度和特异性可能存在问题。
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问
求助,细胞热休克实验?
Eason老歌迷
没有具体的说规定用啥,我们实验室用的是胸腺细胞和t淋巴细胞株。
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问
口腔鳞癌细胞株培养?
Eason老歌迷
具体分类我看下面有两个人回答了。我个人和学姐更喜欢用atcc的hsc-6。
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问
表达蛋白发现偶尔在上清偶尔在沉淀,这个问题怎么解决,这几次纯化的效果都不好?
朵儿小可爱
建议如果用镍柱来纯化蛋白的时候,纯化的过程纯化之后的溶液当中适当的加一点EDTA,让它螯合脱落下来的镍离子,减少重金属对蛋白的伤害
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问
乳腺癌细胞原代培养接种后出现方形状物是什么原因以及方形状物是什么?
Eason老歌迷
我之前也遇到过这种情况,这个可能跟细胞的状态有关系。比如细胞状态不好的时候在消化过程中细胞就会成成团的被消化下来,很难吹开。
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问
请问有时候WB结果呈现以下这种条带,可能是什么原因呢?
朵儿小可爱
胶体中存在气泡,或不溶性杂质,胶不均不平整。
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问
有关软琼脂集落形成的问题
balalaLy
如果加上层胶的时候温度高可能会导致下层胶部分溶解,细胞漏下去
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问
金属电极
bamboopiggy
铜丝的熔点很低,加热后抗氧化性能极差,铜氧化后,导电性能会变差。
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问
如何提高单细胞测序的成功率?
balalaLy
经过组织酶解消化产⽣的细胞碎⽚和游离RNA产⽣严重的背景⼲扰,操作过程中应尽量去除这些干扰因素
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问
请问流式是不是只能得到相对细胞含量呢
yanlai000
组织的话建议做免疫组化,流式做两份组织的treg数量比较不太推荐,首先组织内Treg细胞就比较少,制备单细胞悬液,破膜、染色步骤多,最后不好定量
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问
细胞周期PI 染色和双染法有什么差异
balalaLy
双染是指PI和annexinV双染吧,它是基于凋亡的早期细胞膜上的磷脂酰丝氨酸(phosphotidylserine,PS)从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面这一原理来实现的。Annexin Ⅴ(膜联蛋白 V)是一种分子量为35-36 kDa的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,能与PS高亲和力结合,将Annexin V 进行荧光素FITC标记,利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。而碘化丙啶(P
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问
求助TLR2流式,如何操作?
yanlai000
Invitrogen™,TLR2 Monoclonal Antibody (2B4A1), PE,货号: A15378这就是膜受体,直接单染就可以。具体步骤:取材→制备脾单细胞悬液→孵育抗体→PBS清洗→重悬→上机
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问
求问大佬,柚皮素如何溶解?
yanlai000
DMSO或乙醇溶解,然后灭菌水稀释,最好加2%-5%羧甲基纤维素钠分散颗粒,不然很容易析出沉淀
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