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紧急求助大佬
Eason老歌迷
按照你的思路,自杀质粒应该携带目的片段降解了,但是事实是没有降解,那就说明这个降解通路收到抑制或者是压根就是没转染上。
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问
BMDC与OT-I 细胞共培养
Eason老歌迷
遇到过类似的情况,但是具体的药物不同,也是实际情况和预计情况有很大差别,这种情况建议你重新在做两次重复,看看是什么情况。
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问
流式测细胞钙离子的问题
Eason老歌迷
流式细胞仪测定钙离子变化有一定的问题,例如在测定过程中可能会造成细胞的激活,而钙离子又是很容易激活的。另外测定的值是平均值。如果有条件,建议用confocal。
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问
急!!大鼠脑缺血再灌注Evans blue染色
Eason老歌迷
以前师兄做的时候,他是从颈静脉注射,几秒后钳夹心脏出来的大血管,迫使染料进入冠脉不出来,然后取标本,据说效果很好,还有人从颈动脉注射,也是钳夹主动脉迫使染料留在冠脉,你可以试试,或者调整一下方案
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问
新手小白在线求助!!!
Eason老歌迷
1慢病毒。例如人类免疫缺陷病毒(HIV)、猴免疫缺陷病毒(SIV)、马传染性贫血(EIA)、猫免疫缺陷病毒(FIV)都是慢病毒属,慢病毒属的原文是Lentivirus,其中Lenti-在拉丁文中有慢的意思。你如果想了解具体的慢病毒信息,你可以去购买的官网查一下,基本都有。2我简单介绍一下最经典的慢病毒吧,HIV-1病毒基因组是由两条正链的RNA组成,长度约为9Kb左右,两端是长末端重复序列(LTR
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问
Zdock出现问题
Eason老歌迷
你先看下你的ZDOCK文件有没有可执行权限,如果有还执行不了,那你的zdock程序肯定不在你执行目录下,如果你不会调这个路径,可把zdock程序放到/usr/bin/目录下,然后执行的时候直接ZDOCK就好。
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问
实验设计
Eason老歌迷
你既然要看这两个蛋白表达对它的影响,你可以先跑wb看看正常表达情况,然后做设计引物,构建质粒,转染然后做pcr,可以分几组,一组空转,一组敲低,一组过表达,然后慢病毒转入细胞,然后做细胞实验看看细胞侵袭和迁移能力变化,然后做wb看看这几个细胞里的蛋白表达情况,这些差不多够你开了。
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问
求助!求助!
Eason老歌迷
我给你发我找的实验流程,我建议你配置硫酸钠稀释液浓度要合适,不然微嚢容易黏连。
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问
qpcr求助,溶解曲线双峰
yaonan120
这个基因做了第一次正式实验,发现80度那里提前出来一个峰,觉得是引物二聚体。条件不变,再做一次还是差不多这样。不知道这是不是真的就是引物二聚体还是其他原因?如果是应该改怎么改变反应条件才能不产生引物二聚体?反应体系如下:10ul体系 95度30秒 95度5秒 59度30秒 40个循环SYBR mix 5FP 0.4RP 0.4H20 3.2CDNA 1
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问
包涵体的溶解液,只用脲就可以了吗?有没有更具体的配方?
Eason老歌迷
可以直接用8M的脲或 6M胍融解,取上清,测浓度。直接稀释后包被检测相应抗体。
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问
我想做免疫荧光,看NF-kB的入核,请问一抗使用p65还是p-p65呢
balalaLy
一方面可以看总的p65和p-p65进行对比,一方面可以分离核质,跑wb
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问
怎么收集细胞上清进行酪蛋白ELISA检测?直接保留上清还是收集细胞后离心保留上清?
balalaLy
直接收集不同时间点的细胞上清,离心去除杂质
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问
细胞铺板后还算均匀,长起来后它又不均匀了
Eason老歌迷
是不是没摇好,培养瓶里面加好细胞以后(比如传代好/分好细胞以后),先顺时针摇晃3次,马上逆时针摇晃3次。然后延X轴Y轴分别水平摇动3次。放入CO2培养箱后,平放着培养瓶重复延X轴Y轴分别水平摇动3次。
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问
求助激光共聚焦定位图
balalaLy
染色的步骤中有没有破膜?如果有用tritonx-100破膜可能会造成干扰。
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问
透射电镜看到线粒体里有一个密度很高的黑色圆形是啥呀?
balalaLy
有可能是组织处理过程不好,细胞死亡出现的空泡
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问
请教:这种想法是否用蛋白组学测序 即可实现?
Eason老歌迷
思路是没问题的。不过需要注意两点。一个是标本量要多,第二个是要设置重复性实验
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问
关于电转化
balalaLy
电转所需要的质粒量大概在250ng左右,小提操作没问题的话可以满足
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问
细胞麻烦大家看看
balalaLy
看着细胞像是老化,可能是有污染或者消化的过程时间有点太长,细胞状态很不好
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问
有人用阿佛丁针灸时麻醉吗?
balalaLy
阿佛丁属于国外比较公认但国内用的少的麻药,我做肌电生理是可以用的,麻醉应该也能用吧
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问
抑郁症模型旷场实验的结果是反的,是什么原因呢?
balalaLy
任何实验出现阴性结果或者反向结果都是有可能的,排除掉各种操作误差,重新再做就是了,一次说明不了问题
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