杂交瘤融合率较低

我的问题如下：

1、融合的时候脾细胞中红细胞较多，会有影响吗？

2、在脾细胞和骨髓瘤细胞混合离心后（1200 rpm，8min）细胞团块很紧实，吸干上清后，38°水浴让细胞松散，之后缓慢滴加PEG（50%）1 mL，细胞就成小块样，散不开。这种现象是正常的吗？

3、我的融合率很低，因为是预实验，用的都是普通小鼠，就融合前3天腹腔注射免疫了一次，这会导致融合率低吗？

4、有一些克隆感觉长3-5天就消失 ，目前没有用饲养层细胞，20%的血清+DMEM，请问会影响融合率吗？

多谢各位。