求问各位WB大神

转膜转够3小时吧，转膜液中甲醇的浓度可以调低点

有几个问题，就是大分子蛋白本来就不太好转，可以适当延长转膜时间，这个需要你自己多做几次把握。第二个是现在夏天了，孵二抗时间短点!封闭液你要确保没有小颗粒，小沉淀。

膜上其他部位与一抗或二抗非特异性结合，配置的封闭液可能没有完全溶解，使不容颗粒附着在膜上从而导致发光时候膜上形成黑点。

配置封闭液后最好静止一下，封闭牛奶一定要纯，封闭结束之前要清洗三遍之后再加一抗。

抗体与封闭试剂反应。

使用前过滤封闭试剂。

HRP 偶联二抗中有聚集体。

过滤二抗试剂，去除聚集体。