求问各位WB大神
MeJxy
我的WB，它出了什么问题
分子量：160kb
膜：0.45
胶：8%
电泳：60V浓缩胶+110V分离胶跑到底
转膜：300mA，150min
封闭：5%奶粉室温摇床1.5h
一抗：4℃摇床12h
洗膜：10miundefined3次
二抗：室温摇床1.5h
洗膜：10miundefined3次
显影：A：B=1：1，曝光时间1min
3 个回答
balalaLy
转膜转够3小时吧，转膜液中甲醇的浓度可以调低点
Eason老歌迷
有几个问题，就是大分子蛋白本来就不太好转，可以适当延长转膜时间，这个需要你自己多做几次把握。第二个是现在夏天了，孵二抗时间短点!封闭液你要确保没有小颗粒，小沉淀。
天一湖医者
膜上其他部位与一抗或二抗非特异性结合，配置的封闭液可能没有完全溶解，使不容颗粒附着在膜上从而导致发光时候膜上形成黑点。
配置封闭液后最好静止一下，封闭牛奶一定要纯，封闭结束之前要清洗三遍之后再加一抗。
抗体与封闭试剂反应。
使用前过滤封闭试剂。
HRP 偶联二抗中有聚集体。
过滤二抗试剂，去除聚集体。
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