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科研学霸天团,48小时有问必答
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磷酸化蛋白免疫印记实验
天雨心晴
时间长点,一般问题不大,主要是抗体的浓度和特异性可能存在问题。
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问
包装完的慢病毒的基因组是怎样的?有没有详细介绍慢病毒的书籍?
bamboopiggy
早期的慢病毒载体,是由人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus, HIV)改装而来,包括HIV-1型载体系统和HIV-2型载体系统。慢病毒属于反转录病毒。HIV-1为双链RNA病毒,它的基因组结构和其他的反转病毒类似,含有可编码三种主要病毒结构蛋白的基因,即gag、pol和env,gag基因编码病毒的核心蛋白如核衣壳蛋白(p7)、内膜蛋白(p17)和衣壳蛋白(p2
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问
慢病毒包装完,其基因组是一条单链RNA吗?是慢病毒质粒上的5' LTR到3'LTR吗??
Eason老歌迷
包装好的病毒只含有结构质粒5'LTR和3'LTR之间的RNA序列。包装蛋白的RNA是不进入包装完成的病毒的。
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问
表达蛋白发现偶尔在上清偶尔在沉淀,这个问题怎么解决,这几次纯化的效果都不好?
朵儿小可爱
建议如果用镍柱来纯化蛋白的时候,纯化的过程纯化之后的溶液当中适当的加一点EDTA,让它螯合脱落下来的镍离子,减少重金属对蛋白的伤害
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问
请问有时候WB结果呈现以下这种条带,可能是什么原因呢?
朵儿小可爱
胶体中存在气泡,或不溶性杂质,胶不均不平整。
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问
临床设计,评估新药A和老药B的优劣的同时,能设计A的最佳剂量吗?
bamboopiggy
可以在评估A和B的优劣的同时,设计A的最佳剂量,找到A的最佳剂量和B药比就好了。
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问
我怎么看不懂reviewer是要求怎么修改?
bamboopiggy
1. Comment on complications associated with therapy in the patient 评价与患者治疗相关的并发症2.Comment on Clinical remission details not available reviewer的意思好像是说临床缓解的细节你为啥没有提供,如果你已经写了,可以在回信中说明一下。3. Details of
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问
ROS流式检测
balalaLy
我也做过过氧化氢处理后的流式检测,也出现过这种情况,一个是处理细胞时操作不能太粗暴,另一个是过氧化氢的浓度和处理时间不能太高太久
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问
细胞40x镜放大后,内部出现活动黑点,是污染吗?
bamboopiggy
看图片,不仅细胞内部,培养基中也有,感觉是污染了,你换个液,然后再看看还有没有。
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问
MOI=5是什么意思
天一湖医者
m值为单个宿主细菌细胞感染的噬菌体颗粒数,它等于试验时所用的噬菌体与细菌的数量比例,即:m=噬菌体颗粒数/宿主细菌细胞数。
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问
请问做冰冻切片荧光染色,抗原修复还有必要吗?如果用的话,都用什么方法进行修复呢?
balalaLy
冰冻切片不存在这个问题,不需要抗原修复,石蜡切片的才要,用Edta或柠檬酸钠
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问
请问冰冻切片染色前是否再次用4%PFA再次固定?对结果的影响大不大?
balalaLy
我一般都是切片前新鲜组织固定,切好片后不固定,直接室温放置1小时左右过一遍pbs开始染色步骤
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问
PAGE上样量需要多少才能看到条带,我纯化蛋白上样,脱色之后什么也看不到,请问是怎么回事?
bamboopiggy
蛋白浓度在20-40ug之间,可以看到条带的,如果你看不到条带,可能是你的蛋白表达有问题
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问
细胞周期PI 染色和双染法有什么差异
balalaLy
双染是指PI和annexinV双染吧,它是基于凋亡的早期细胞膜上的磷脂酰丝氨酸(phosphotidylserine,PS)从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面这一原理来实现的。Annexin Ⅴ(膜联蛋白 V)是一种分子量为35-36 kDa的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,能与PS高亲和力结合,将Annexin V 进行荧光素FITC标记,利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。而碘化丙啶(P
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问
求助TLR2流式,如何操作?
yanlai000
Invitrogen™,TLR2 Monoclonal Antibody (2B4A1), PE,货号: A15378这就是膜受体,直接单染就可以。具体步骤:取材→制备脾单细胞悬液→孵育抗体→PBS清洗→重悬→上机
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问
如何选择聚乙二醇(6000)的浓度来沉淀DNA?
天一湖医者
采用 NaCl盐析法,将线粒体大分子RNA与线粒体DNA分开,得到线粒体DNA 粗制品.再用聚乙二醇6000沉淀法进行纯化,从而得到纯的线粒体DNA.
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问
【求助贴】小鼠APP/PS1基因型鉴定
bamboopiggy
胎鼠和成年鼠的基因鉴定方式是一样的,建议你加一个成年鼠的做阳性对照,看是不是pcr过程中出现问题了。
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问
请问大家有遇到过内参的CT值变化的情况吗
balalaLy
有时候酶降解了也会出现内参ct值变化从而导致结果出现偏差
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问
基因频率如何计算
汤姆卜丽波
A频率x,X²×3577=1382x=62.1%则a频率=37.9%
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问
脊髓冰冻切片
balalaLy
我自己做过灌注和不灌注的,觉得区别不大。包埋后速冻到液氮我也试过,会裂开。我一般是在切片机里边等它冻住了再放-80
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