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实验设计
Eason老歌迷
你既然要看这两个蛋白表达对它的影响,你可以先跑wb看看正常表达情况,然后做设计引物,构建质粒,转染然后做pcr,可以分几组,一组空转,一组敲低,一组过表达,然后慢病毒转入细胞,然后做细胞实验看看细胞侵袭和迁移能力变化,然后做wb看看这几个细胞里的蛋白表达情况,这些差不多够你开了。
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问
求助!求助!
Eason老歌迷
我给你发我找的实验流程,我建议你配置硫酸钠稀释液浓度要合适,不然微嚢容易黏连。
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问
qpcr求助,溶解曲线双峰
yaonan120
这个基因做了第一次正式实验,发现80度那里提前出来一个峰,觉得是引物二聚体。条件不变,再做一次还是差不多这样。不知道这是不是真的就是引物二聚体还是其他原因?如果是应该改怎么改变反应条件才能不产生引物二聚体?反应体系如下:10ul体系 95度30秒 95度5秒 59度30秒 40个循环SYBR mix 5FP 0.4RP 0.4H20 3.2CDNA 1
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问
我想做免疫荧光,看NF-kB的入核,请问一抗使用p65还是p-p65呢
balalaLy
一方面可以看总的p65和p-p65进行对比,一方面可以分离核质,跑wb
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问
怎么收集细胞上清进行酪蛋白ELISA检测?直接保留上清还是收集细胞后离心保留上清?
balalaLy
直接收集不同时间点的细胞上清,离心去除杂质
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问
细胞铺板后还算均匀,长起来后它又不均匀了
Eason老歌迷
是不是没摇好,培养瓶里面加好细胞以后(比如传代好/分好细胞以后),先顺时针摇晃3次,马上逆时针摇晃3次。然后延X轴Y轴分别水平摇动3次。放入CO2培养箱后,平放着培养瓶重复延X轴Y轴分别水平摇动3次。
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问
求助激光共聚焦定位图
balalaLy
染色的步骤中有没有破膜?如果有用tritonx-100破膜可能会造成干扰。
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问
透射电镜看到线粒体里有一个密度很高的黑色圆形是啥呀?
balalaLy
有可能是组织处理过程不好,细胞死亡出现的空泡
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问
请教:这种想法是否用蛋白组学测序 即可实现?
Eason老歌迷
思路是没问题的。不过需要注意两点。一个是标本量要多,第二个是要设置重复性实验
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问
关于电转化
balalaLy
电转所需要的质粒量大概在250ng左右,小提操作没问题的话可以满足
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问
qPCR
balalaLy
一般就是看CT值高不高,和溶解曲线是不是单峰,miRNA CT24 说明表达量也不低呢。
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问
禽流感病毒rt pcr产物跑胶
汤姆卜丽波
你的rtpcr是正常的?但是跑条带跑不出来?是不是表达量不高,这样也跑不出来。
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问
实时荧光定量PCR条件摸索
balalaLy
cDNA稀释倍数不用太纠结,一般都是按照1:10或者1:20这样稀释,如果需要做的基因数量不是很多,就按1:10,最好按照固定的比例,比如逆转录用500ng或者1000ng的总RNA,然后用1:10这样的比例稀释cDNA,这样你不同批次的实验之间进行对比也比较合理
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问
细胞麻烦大家看看
balalaLy
看着细胞像是老化,可能是有污染或者消化的过程时间有点太长,细胞状态很不好
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问
请教一下各位大佬,胃癌BGC823细胞中间的颗粒是啥?
汤姆卜丽波
感觉不像活体物质,可能是杂质掉进去了
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问
硅藻缺硅同步化处理为什么做不出来?
汤姆卜丽波
实验条件不一样。有可能他做得出来你做不出来。把时间和作用浓度再摸索一下
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问
能不能用酪蛋白ELISA试剂盒检测后,实现对细胞的鉴定而不提取RNA做PCR?
汤姆卜丽波
那你还得提蛋白。。。而且有其他蛋白质存在,ELISA的准确率大大降低
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问
生物组织的消解方法,ICP-MS测主微量
汤姆卜丽波
一般是经恒温干燥后,采用硝酸-过氧化氢体系微波消解
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问
有人用阿佛丁针灸时麻醉吗?
balalaLy
阿佛丁属于国外比较公认但国内用的少的麻药,我做肌电生理是可以用的,麻醉应该也能用吧
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问
抑郁症模型旷场实验的结果是反的,是什么原因呢?
balalaLy
任何实验出现阴性结果或者反向结果都是有可能的,排除掉各种操作误差,重新再做就是了,一次说明不了问题
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