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科研学霸天团,48小时有问必答
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请问大家,这个质粒图谱的平行箭头表示什么?为什么会有两个平行箭头?为什么箭头有反向?
Eason老歌迷
质粒上有多个基因,基因的方向不一样,所以就有不一样的箭头方向。如果一个图谱上有两个方向,可能是有两个启动子。
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问
跑WB时,浓缩胶太长会导致条带连在一起或模糊一片吗?
秋秋欣欣
胶连成一片不是浓缩胶太长的原因,多半是因为样品里盐容量含量太高,被拉着往两边跑
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分子伴侣共表达的蛋白纯化
Eason老歌迷
通常机器用线性方法洗脱蛋白这样方法有的时候并不能得到好的纯化效果,可选择不同浓度的咪唑做阶段洗脱,此外可用盐酸胍代替尿素试一试。
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问
WB组蛋白H3K27
Eason老歌迷
我也遇到过这种情况,一个是你用的maker是不是准确,我有一次用的新maker,它就不准。二是你杂带很多,那就说明可能是你封闭没做好,或者是选的抗体特异性不高。
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问
Saos2转染问题
Eason老歌迷
质粒DNA导入细胞有多种方法,包括物理介导(电穿孔法、显微注射和基因枪)、化学介导(磷酸钙共沉淀法、载体转染法等)和生物介导(原生质体转染、病毒介导的转染)三类途径。这三类技术中,又以载体转染法最为常用。国际上应用较早的转染载体多为脂质体类载体,但此类转染载体细胞毒性较大,转染效率往往也不够理想。近年类,纳米生物材料类载体的应用逐渐增多,此类载体最大的优点是细胞毒性较低,部分品牌载体的转染效率也显
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问
急求如何筛选与病毒感染相关的细胞因子风暴相关宿主蛋白,谢谢各位大佬!
Eason老歌迷
具体参看这篇文章。作者用高通量筛选鉴定SARS-CoV-2感染必须基因研究者使用人的GeCKOv2文库病毒(~0.2 MOI)感染A549ACE2细胞,嘌呤霉素药筛9天,随后0.3和0.01 MOI SARS-CoV-2分别感染巴细胞,感染24h检测核衣壳(N)蛋白表达,感染6天后存活的细胞被提取DNA用于高通量测序。用3种方法(Robust rankaggregation,RIGER weigh
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问
内参的条带出现深浅不一的话,需要调上样量把他们调的差不多嘛?
whilt-shirt
是的,如果内参不齐审稿人会对你的数据产生质疑
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问
免疫组化检测肿瘤组织CD4+T细胞和CD8+T细胞比例,用CD4单抗和CD8单抗作一抗标记就可以了吗
balalaLy
双阳是细胞怎么区分?可能选其它的Marker会好一点或者用荧光双染
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问
EMSA求教!!!
天一湖医者
EMSA实验需要设置许多组对照实验。EMSA非放射性探针设计要注意:(1)防止错位配对、封闭成环,排除目标序列以外结合位点的(2)防止产生空间位阻(3)注意AT/GC比例(4)EMSA探针不宜太长,一般是几十碱基对。太长会产生过多结合位点导致结果分析困难,还会产生超级螺旋结构而掩盖结合部位。(5)建议采用Biotin或红外荧光标记,尽量不要采用DIG标记。,探针两端都有标记以提高灵敏度
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问
WB煮蛋白的温度和时间
balalaLy
5-10min,95-100度,这个范围内都可以
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科研问题请教
秋秋欣欣
产品纯化后,任意一种酶都可以自动在后面加a
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问
IHC肠组织石蜡切片染色背景过高
秋秋欣欣
背景高可能是一抗或者二抗孵育的时间太长
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小胶质细胞
天一湖医者
这个目前个人觉得最有效的分离方法,目标:小胶质细胞(microglia)材料:长到已经融合的小鼠脑胶质细胞混和培养(mixed glial culture)Trypsin-EDTA solution (2.5% trypsin, 1 mM EDTA in HBSS; 25200-072)Dulbecco’s modified Eagle medium-F-12 nutrient mixture (
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HepG2细胞显微镜下呈黄色正常吗?
秋秋欣欣
比较量的黄色估计是死细胞,正常是不会这样的
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【求助】急!大鼠阿霉素肾病模型24小时尿怎么处理送检
whilt-shirt
你要是送检验科直接送过去就行,如果是自己用试剂盒检测就要离心,检测上清中的成分
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western blot 内参相关问题?
balalaLy
内参抗体一般很少出问题,使用次数多或者抗体稀释液不好会容易出杂带。用5%bsa in tbst 稀释或者用商品化的抗体稀释液。
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小鼠F0代生下的第一窝仔鼠为F1代,第二窝为F2代,第三窝为F3代吗?那如果F1代的小鼠进行合笼后生下的仔鼠该怎么命名,是第几代
Eason老歌迷
原则:F0代小鼠之间不能相互交配。F1代及F1代之后繁育原则:由F0代小鼠和野生型背景鼠交配得到的后代小鼠称为F1代。)阳性F1代小鼠可用于保种建系。那还是f2
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问
可以用丙酮提取细菌中的化合物吗
天一湖医者
可以,可以用丙酮提取细菌中的化合物。
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镍柱纯化目标蛋白,杂蛋白分离不开
秋秋欣欣
可以使用咪唑梯度洗脱,杂蛋白说明纯化有问题
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问
培养瓶放回培养箱前喷酒精对细胞生长影响大吗?
yanlai000
和我们实验室相同的操作😂 ,建议还是少喷一点,时间长了还是有一定影响
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