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        谁做过人源MCSs成脂实验呀

        相关实验:TCR人源化动物模型

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        顺利毕业呀呀

        每篇文献成脂配方不一样,哪一个比较合适呀?

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        2 个回答

        user-title

        天一湖医者

        有帮助

        1.从单层细胞中收集MSCs;

        2.向6孔培养板的每个孔中加入2ml CCM,共有1&time105个细胞。最终密度约1&time103个细胞/cm2;

        3.将上排3个孔标记为“成脂”,下排3个孔标记为“阴性”;

        4.在37℃,5%CO2环境下孵育,每隔两天更换一次培养基,直到细胞达到7.%—80%汇合;

        5.达到所需的细胞密度时,从孔中吸出完全样机,向6孔培养板上排的孔中加入2ml FDM,向下排的孔中加入2ml CCM;

        6.在37℃,5%CO2环境下孵育,每隔两天更换一次培养基。ORO检测时,于21天对细胞进行染色;

        (1)从培养箱中取出分化后的MSCs,每孔中的单层细胞用2ml A润洗两次;

        (2)每孔中加入2ml福尔马林,室温固定单层细胞10min;

        (3)吸出福尔马林,每孔中加入2ml A润洗两次后,再用2ml蒸馏水润洗一次;

        (4)加入2ml ORO工作液,室温孵育30min;

        (5)过量A润洗各孔,直到“阴性”孔中的背景染色最大限度地清除;

        7.用显微镜观察标记为“成脂”的单层细胞评价脂滴的染色程度。成脂分化达到令人满意的水平时,单层细胞ORO着色面积超过30%。此时,单层细胞可在4℃ A中最多存放7天。或者,将ORO从着色的单层细胞中提取出来,用先前描述的方案进行测定。

        user-title

        Eason老歌迷

        有帮助

        获取成人脂肪组织,使用手术吸脂的方式获得目标脂肪组织。将使用吸脂手术取得的脂肪组织通过D-Hank’s把麻醉药和血细胞洗涤干净。洗涤后用0.075%的I型胶原酶37摄氏度消化一小时。将未消化组织使用100目筛网过滤掉。室温、1400转/min、离心十分钟,将上清去除。再次使用D-Hank’s重悬洗涤2次(室温、1200转/min、离心七分钟),将胶原酶去除掉。离心收集细胞。

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