RNAi载体构建
景大宝是最棒的
各位同学们，近期本人要构建rnai载体做转基因，但由于实验室没有人做过，所以想要请教一下。我用的载体是pfgc5941，目的基因片段1500bp左右，载体上的内含子长1300。那设计引物的话内含子需要截一段吗还是不用动？目的基因是选取一段序列去连接吗？怎么选取呢？
1 个回答
Eason老歌迷
RNAi载体设计与构建中设计过程如下：有研究以pCDNA3.1(+)载体为基本骨架,在其转录单元的5’端添加了一个自剪切的HDV核酶用于切掉转录后的5’帽子和其基因编码序列的3’端添加了一个自剪切的烟草环斑病毒发夹状核酶用于将3’polyA切掉,又在发夹状核酶下游添加了一个加尾信号BGHpA(牛生长激素加尾信号)。为了更加保险的防止通读现象的发生在BGHpA加尾信号下游添加了一个自我剪切的烟草环斑病毒核酶和能够延缓RNA聚合酶Ⅱ转录的人β-actin基因(Humanβ-actingene)减速序列。为以后用G418筛选得到稳定表达长双链干扰RNA的细胞系,又将整个结构转移到已经改造好的装有新霉素抗性基因(Neomycin)表达结构的的pBluescriptⅡSK(+)载体中。
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