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问
原代神经元培养过程中聚团脱落是为何
Eason老歌迷
可能有多种原因:1.消化不完全,或消化时间不够,都会出现聚团的现象。2、有些细胞就是有相互聚集的特性,这个很难解释,即使吹打均匀,细胞在贴壁时候也还是会聚集在一起。你参考一下和你培养相同细胞的朋友,看看他们是否也是这种情况。3.接种密度过高,稍微降低密度试试。4.瓶子没洗干净。换洗的培养瓶试试。
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问
镍柱层析后收集蛋白溶液怎么保存?
bamboopiggy
pbs透析后,放-80保存就可以。不要反复冻融
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问
卡介苗培养污染酵母菌
天一湖医者
严格无菌操作,试验前要用75℅酒精喷撒并擦拭超净台和所用器具以及双手,操作时尽量在火焰前操作,外植体消毒要彻底,消好毒的外植体无菌水洗过后一定要注意不能再污染,可放火焰前方,并且手尤其不能在上面晃动,接种时要将镊子、刀子及盛培养基的瓶口烧好,镊子冷却后(可在培养基上蘸一下快速冷却)尽快将外植体45度角插入培养基,然后再稍烤一下瓶口盖上盖子。另外,无菌操作还要注意各种物品在无菌操作台上的摆放,要整洁
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问
蛋白无活性
bamboopiggy
你是用什么方法判断活性的呢?裂菌后,活性跑到沉淀中去了,感觉是不是形成包涵体了?
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问
TLC问题
天一湖医者
最有可能的就是展开板不均匀,薄厚不均一,或者有气泡存在
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问
PCR没有想要目的条带只有其他条带
天一湖医者
最常见是引物不特异,如果引物与模版其他地方结合,扩出来的指定不是你想要的大小;其次考虑模版问题,如果模版本身有大规模重复(很长的重复或串联重复),扩出来的东西也可能会多一段或少一段。然后考虑酶的活性,
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问
外泌体保存
天一湖医者
要验证血液外泌体里的目的基因,可以直接保存血液。
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问
RNA的提取用什么方法最好,检测结果如何最准确?
天一湖医者
常见的RNA提取方法i沉淀法Trizol裂解液是总RNA提取的常用试剂, 内含苯酚、异硫酸胍等物质,能迅速破碎细胞,释放核酸,并抑制细胞释放的核酸酶。1)组织中提取RNA: 第一步需要液氮研磨,将组织块放入研钵中,加入少量液氮,迅速研磨,待组织块变软,再次加入液氮研磨,反复三至四次后加入50-100mg/ml的Trizol,转入离心管中,室温放置10min,使其充分裂解。12000rpm,离心5
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问
GSEA分析数据的NES值怎么看?正负分别代表什么?
Eason老歌迷
由于ES是根据分析的数据集中的gene是否在一个功能gene set中出现来计算的,但各个功能gene set中包含的gene数目不同,且不同功能gene set与data之间的相关性也不同 较data set在不同功能gene set中的富集程度要对ES进行标准化处理,也就是NES,NES=某一功能gene set的ES/数据集所有随机组合得到的ES平均值。值为正,表示某一功能gene集富集在排
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问
PCR是在体外提供模板,高温变性,低温退火,室温延伸后才开始进行DNA片段的扩增的嘛
秋秋欣欣
PCR是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链,低温(经常是60°C左右)时引物与单链按碱基互补配对的原则结合,再调温度至DNA聚合酶最适反应温度(72°C左右),DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。
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问
ACE2蛋白做wb
秋秋欣欣
是你的蛋白有问题还是抗体的问题呢,蛋白测浓度检测一下吧
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问
DNA纯化
秋秋欣欣
A.取1.5ml菌体培养物于一灭菌Ep管中,12000rpm离心1min,丢去上清夜,收集菌体。B.加入400ul裂解液(40mMTris-醋酸,20mM醋酸钠,1mMEDTA,1%SDS,pH7.8)混匀,置于37oC水浴1hr。C.然后加入200ul5mol/L的氯化钠溶液,混匀后于13000rpm离心15min。D.取上清液,用苯酚抽提2次,氯仿抽提1次。E.加两倍体积无水乙醇,1/10体积
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问
【求助】想问大家细胞实验中叶酸建议用什么溶解呢
秋秋欣欣
叶酸较易溶于乙醇,酚吡啶,氢氧化碱和碳酸碱溶液。然后再调ph
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问
我这小鼠怎么了
bamboopiggy
不做病理,看不出来,只能考猜。感觉你这个肝脏缺血,肿大
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问
有做过CIA模型的大佬吗
Eason老歌迷
可能是和感染有关,要注意打针前消毒。同时建议1免得时候打在尾根部,2免打在小鼠尾根部靠上一点的地方(可以理解为屁股)。
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问
转染质粒带绿标的细胞可以做流式细胞周期吗?急
bamboopiggy
可以做啊,PI 的488和GFP不在一个通道。空载也是带绿色荧光的,所以没法排除。
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636 围观
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问
tunnel染色和annexin V两种细胞凋亡实验怎么选择呢
bamboopiggy
可以都做,互为验证。如果只能做一个,首选annexin v
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问
shRnA稳转株构建成功后需要隔段时间再次鉴定敲降效果吗?
bamboopiggy
一般三个月检测一次吧,我用的是带绿色荧光的,看荧光就可以
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问
构建稳转株是用哪种转染试剂好?PEI的使用方法如何?
bamboopiggy
只要能把质粒转进去,哪种转染试剂都可以,pei也可以,毒性低,效率高
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问
慢病毒感染细胞时一定要用polybrene吗?
Eason老歌迷
Polybrene是带正电的小分子,它可以抵消病毒囊膜和细胞膜表面的阴离子,提高慢病毒对细胞的感染效率,通常加入polybrene能提高感染效率2~10倍。其实,非VSVG包膜的病毒不用polybrene,这个具体情况要具体分析。
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