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        RNA的提取用什么方法最好,检测结果如何最准确?

        相关实验:总 RNA 提取实验

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        dxy_9xr67828

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        3 个回答

        user-title

        秋秋欣欣

        有帮助

        我们用的是公司的总RNA试剂盒,浓度和纯度都挺好的

        user-title

        天一湖医者

        有帮助

        常见的RNA提取方法

        i沉淀法

        Trizol裂解液是总RNA提取的常用试剂, 内含苯酚、异硫酸胍等物质,能迅速破碎细胞,释放核酸,并抑制细胞释放的核酸酶。

        1)组织中提取RNA: 第一步需要液氮研磨,将组织块放入研钵中,加入少量液氮,迅速研磨,待组织块变软,再次加入液氮研磨,反复三至四次后加入50-100mg/ml的Trizol,转入离心管中,室温放置10min,使其充分裂解。12000rpm,离心5min,弃掉沉淀。细胞中提取RNA:根据细胞量加入对应的Trizol,在摇床放置10-15min后,收集到离心管中。

        2)按照200ul氯仿/ml Trizol加入离心管中,混匀后室温放置10min(切勿用涡旋振荡仪,防止基因组DNA断裂)。

        3)4℃,12000rpm,离心15min。

        4)将上层水相转移到新的离心管中,按照500ul异丙醇/ml Trizol加入离心管中,室温放置10min。

        5)4℃,12000rpm,离心15min。

        6)按照1ml 75%无水乙醇/ml Trizol,加入到离心管中,4℃,12000rpm,离心10min清洗一次RNA沉淀,室温放置5min左右晾干(RNA不可过于干燥,否则很难溶解)。

        7)加入适量DEPC水溶解RNA,在Nanodrop上测定RNA浓度。

        ii试剂盒法

        主要是利用离心柱法提取RNA,具体可根据各试剂盒的说明书进行提取。主要利用高盐吸附、低盐洗脱的原理,在于操作简单,耗时短,RNA完整性好,但是有的试剂盒浓度、纯度略低于沉淀法。

        user-title

        Eason老歌迷

        有帮助

        主要有苯酚、异硫氰酸胍、CTAB、LiCl密度梯度、Trizol等方法。现在常用的是Trizol法。我们实验室都是用的离心柱提取,感觉效果不错。

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