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        蛋白无活性

        相关实验：蛋白质免疫印迹(Western Blot，WB)

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        dxy_v62ex2a3

        求助各位大佬，在文献中查找到一个酶，想用来做后续研究，用NCBI查到的氨基酸序列，连载体pet28a转BL21，纯化后有目的条带，但是蛋白无活性。裂菌上清无活性，活性都在沉淀中，怎么搞啊

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        3 个回答

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        你是用什么方法判断活性的呢？裂菌后，活性跑到沉淀中去了，感觉是不是形成包涵体了？

        user-title

        Eason老歌迷

        有帮助

        建议你重新设计引物，在转到别的载体试一试。你说蛋白没有活性，为什么裂菌以后，沉淀有活性呢？

        user-title

        天一湖医者

        有帮助

        不是说你的蛋白失去了活性，而是很可能你的蛋白表达出来之后就没有活性。既然你的蛋白本来就含有二硫键，那么不需要在提纯的时候加2-巯基乙醇。

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