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问
这是之前问的一个问题,由于丁香平台不能回复,还请各位大佬看一下下面的图文
Eason老歌迷
我还是觉得一楼那个方法可行,查找相关酶的序列,和你的目标酵母菌序列进行对比。或者我在教你一个方法。你就用ncbi,打开NCBI,用关键词在Taxonomy数据库搜索。得出它的拉丁文,并且有一个问题需注意,酵母菌下还是有一些种的。知道了酵母菌的txid,就很容易了。一搜就出来了。上面已经定位到了酵母菌下的所有蛋白的基因了。上面如果要找核酸的,把数据库选择为Nucleotide就行了。接下来就是定位到
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问
双荧光酶素实验中把构建的含启动子区的载体质粒和插入转录因子的载体质粒共转染查看转录活性时还需要PGL-TK做内参三个质粒转染可否
Eason老歌迷
需要啊,肯定是需要的,一个空白对照,一个空转,一个转你的目的蛋白
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问
鼠源肝癌细胞H22稳转接瘤
Eason老歌迷
我的师姐就是用的我的用KM小鼠接种的腹水好像也是用在BALB/C上的,挺好的,这个不影响吧。我还直接用腹水离心以后用生理盐水清洗离心,然后体外培养的,都没有什么特别的不一样。我估计你的传代细胞有问题,没什么活性,所以长不起来。
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问
小鼠成瘤后瘤子大小形状各异怎么办?
Eason老歌迷
不是所有的肿瘤都能够长的均一,形态规则的,我做了8年的肿瘤模型,接触过三四十种瘤株,能够体积均一,形态规则的瘤株不是太多。所谓肿瘤生长至一定大小是指的平均值,不可能每一只肿瘤都是一样大的,关键是控制SD不能太大,一般SD为平均值的1/3算正常,1/4就很漂亮,1/5那是极品了。一般构建肿瘤模型,裸鼠主要保证周龄,周龄小一点好。
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问
coip加入beads之后要mix和wash,是直接用枪吹打好还是用vortex好?
dxy_o38ns7o8
枪吹比较好,涡旋振荡力太大 容易破坏结合力 阳性率降低
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问
ip实验中收细胞前加MG132的目的是什么?什么情况下可以不加?
天雨心晴
看你的实验目的了。因为高浓度处理时间长了,细胞会大量死亡。
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问
高分子材料水凝胶包埋蛋白,计算包封率时,游离的蛋白如何定量比较准确?
Eason老歌迷
我用的是差量法。蛋白质投加量减去洗涤液中的蛋白质含量(即没有包埋进去的蛋白质)。 测蛋白的方法--分光光度发,我知道的有两种。一种是修正的Lorry法,另一种是考马斯亮蓝法。 我用的Lorry法。
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问
请问细胞长满一个T25瓶时,大概能铺几个6孔板,使每个6孔板的孔中达到合适的试验细胞密度?约每毫升10的5次方个细胞?
Eason老歌迷
一个T25的细胞瓶相当于6个培养板。铺6孔板得看接种密度和铺几块板,如接种密度为每毫升10的5次方,每孔加2毫升,一个25平方厘米的培养瓶可铺4块6孔板。
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问
原代神经元培养过程中聚团脱落是为何
申东熙老伯
贴壁不牢是一种可能,是因为细胞污染。操作过程注意一下。再就是可以细胞放到培养皿的时候可以少加点培养基,在培养箱培养个三十分钟等细胞完全贴壁再加足培养基。
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问
请问一下蛋白质和多糖静电结合的量怎么测?
Eason老歌迷
先把蛋白质变性去除,如用钨酸沉淀,过滤后再测多糖。
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问
如何选择合适的家兔,哪些特征需要注意?
Eason老歌迷
看细节选定好具体目标后,首先要检查一下兔兔的五官有无异常,特别是眼睛,用手在兔兔的一侧晃动,观察兔兔是否有反应,兔子的正前方有视觉盲区,所以要从侧面晃;耳朵能自由转动,内侧没有明显的皮屑或痂皮;鼻子内侧呈淡粉色,没有鼻水,鼻子周围没有毛发打结或粘连;牙齿发育正常,没有弯曲或断裂;胡须无明显分叉。一只手托住小兔子的身体,把它翻过来,检查脚底板和屁股附近的毛发,确认没有打结或粪便污染;**及**周
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问
请问有没有收网络药理学的期刊,没有验证实验,最好是不收APC费用的
Eason老歌迷
期刊名称:Briefings in Functional Genomics; 期刊ISSN: 2041-2657;
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免疫荧光双染抗体选择
Eason老歌迷
应该是没问题的。选取一抗时,要求来源于两种不同的动物,我用的是来源于家兔和大鼠的抗体,二抗则是不同荧光信号标记的。
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为什么很多实验以丁酸盐处理小鼠,但是测小鼠粪便都测丁酸呢
Eason老歌迷
使用丁酸盐处理小鼠是因为丁酸盐是结肠细胞能量来源,促进小肠粘膜合成,酮体合成 促进小肠细胞增殖、分化、成熟。测小鼠粪便测丁酸,是因为肠道微生物群的这些变化随后导致丁酸等保护性SCFAs的产生增加,进而触发显著的抗氧化、抗炎和屏障增强程序,从而减轻肠道炎症和损伤。
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试剂保存:乙醇,甲醇,乙二醇,甲醛,氯仿,丙酮,氢氧化钠存放在保存柜,产生了!嗯个很难闻的味道,请教一下,这个气味是什么反应呢?
Eason老歌迷
并不是什么反应,这些化学药品都需要妥善保管,氯仿是甜味,丙酮是芳香味,可能是甲醇吧
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问
大鼠取血,除了剪尾巴,还有哪些呢?要取1毫升血离心取血清做ELISA
Eason老歌迷
割尾法,鼠尾刺血法,眼眶静脉丛法,断头取血,心脏采血,颈动静脉采血,股动静脉采血等方法。
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问
过滤器膜是怎么选择的呢?
Eason老歌迷
首先要考虑化学相容性,即滤膜是否耐酸、碱、有机溶剂等。常用的微孔滤膜一般是圆片滤膜,比如25mm圆片微孔滤膜,可以配合针头滤器连接注射器使用。47mm圆片微孔滤膜,可以使用换膜滤器,布氏漏斗、压力容器等配合真空泵,
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问
做WB实验时遇到高背景、多条带的情况怎么办?
sophomore
首先,高背景,可能是封闭液不是新配制或者可能有其他问题,最好重新配制封闭液,5%BSA或奶粉,商品化的封闭液都可以。而多条带有出现杂带的话一般先考虑有没有抗体特异性的问题,或者是与非目标蛋白结合后,会出现杂带可能。
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问
请问一下大家,最近在做GST pull down试验,发现GST也能将我互作蛋白的his拉下,是什么原因呢?
bamboopiggy
是单纯的his?还是你的互作蛋白耦连了his?如果是耦连的,当然要跟蛋白一起被拉下来啊。
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问
电泳100v,30min 120v,40min,转膜60min 封闭5小时,一抗过夜,2抗1h, lc3条带出来不直怎么办
墨幽染染
条带不均匀可能是由于配的胶不均匀导致,因此配胶时要注意配胶用的小烧杯,水,SDS,Tri s,等等干净无杂质,贴边角加入液体,凝固时避免大幅度动作,保证配出来的胶均匀无杂质
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