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microRNA minics转染
balalaLy
有可能转染失败,刚转染的时候看到的淡淡的是没有转染进去的mimic,时间长了这些rna降解掉了就没有荧光了
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问
急求小鼠大脑中动脉位置图,有动物解剖标本图做好
天一湖医者
小鼠大脑中动脉的解剖学位置图。
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问
3near gene是什么突变
天一湖医者
3near gene是3'-侧翼区(3'-near gene)的碱基突变
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问
Western Blot转膜效率低怎么办?
Eason老歌迷
你是用的半干转还是湿转,你的蛋白是多少呢?如果要是大蛋白可以试一试湿转,效果更好。你的转膜液用几次更换呢?也可以增加转膜时间试一试。
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问
WB实验显色或曝光后无条带原因在哪儿?
Eason老歌迷
可能有几个原因,一个是你的转膜没转好,或者是转膜时间太长转过了。二个是你剪膜直接把目的条带剪掉了。三可能是你孵抗体没孵好,或者是一抗二抗选错了。四可能是你的显影操作有问题
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问
westernblot配胶问题
Eason老歌迷
没啥区别,我都是用过的。之前用无水乙醇,后来该用的水。无水乙醇效果更好一丢丢
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问
病毒分离样品脂类物质怎么去除?
天一湖医者
将预冷的有机溶剂等量加入、样品中,强烈振荡后,1000 r/min离心5 min,脂类和非病毒蛋白保留在有机相,病毒则保留在水相。应当注意的是,对有机溶剂有抗性的病毒才能这样处理。
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问
wb检测蛋白时,过曝的话,结果还可信吗?
Eason老歌迷
建议你重新跑吧。要么降低一下你的上样量,或者是稀释你的抗体倍数,或者是减少你的曝光时间
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问
WB检测蛋白,条带大小与理论大小不相符,什么原因?
Eason老歌迷
如果蛋白大小和预测值有明显倍数关系,那就要考虑一下这个蛋白是不是二聚体或者多聚体啦。
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问
每次曝出来的片总是中间空心,想不通是为什么
Eason老歌迷
可能是你转膜的时候,你的膜和胶之间有气泡,你没赶走。
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问
BCA调完上样内参还是不齐什么原因
Eason老歌迷
调整上样量,如果还是调不齐,建议做灰度扫描,将目的蛋白的灰度值比上对应的内参,这样比较准确,目前很多文章的western图都会附上相应的灰度扫描结果,这样更加定量和直观。或者你配的胶的问题,可能没凝好。
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问
这是之前问的一个问题,由于丁香平台不能回复,还请各位大佬看一下下面的图文
Eason老歌迷
我还是觉得一楼那个方法可行,查找相关酶的序列,和你的目标酵母菌序列进行对比。或者我在教你一个方法。你就用ncbi,打开NCBI,用关键词在Taxonomy数据库搜索。得出它的拉丁文,并且有一个问题需注意,酵母菌下还是有一些种的。知道了酵母菌的txid,就很容易了。一搜就出来了。上面已经定位到了酵母菌下的所有蛋白的基因了。上面如果要找核酸的,把数据库选择为Nucleotide就行了。接下来就是定位到
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问
蛋白疏岁水性较强,需要加助溶剂才能提取出来?
Eason老歌迷
既然是提取那肯定是有沉淀和上清,目标蛋白的分子量是应该知道的,那么跑电泳先看它到底是在上清还是沉淀里,剩下的问题你再解决如何提取。对于不同的酶要看酶稳定如何,可以用不同的PH去提取,曾经提取一个酶用水就是提取不出来,需要用盐才能提取出来,多试试,设计个方案,这样才能解决问题,所以不一定加甘油就管用,还得注意破碎本身会不会有问题,倒回去做做也许能找到真正的原因。
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问
通过 iTRAQ/TMT 实验筛选到的差异蛋白,如何挑选验证?
Eason老歌迷
如Western blot、ELISA 、PRM(平行反应监测),该方法是基于靶向的蛋白质组学,研究特定蛋白的表达变化。也可以用代谢组学,基因组学等多组学互相验证。
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问
请问背景颜色深,目的蛋白颜色浅是因为什么?
Eason老歌迷
可能是你的封闭没有封闭好,也可能是目的蛋白表达量太少了,或者是你转膜没转好
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问
双荧光酶素实验中把构建的含启动子区的载体质粒和插入转录因子的载体质粒共转染查看转录活性时还需要PGL-TK做内参三个质粒转染可否
Eason老歌迷
需要啊,肯定是需要的,一个空白对照,一个空转,一个转你的目的蛋白
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问
蛋白质免疫印迹实验转染时间多长?
Eason老歌迷
你说的是转膜?转膜看你是半干转还是湿转,半干转快30分钟,湿转可能1-2小时
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问
蛋白质免疫印迹实验总蛋白量多少?
inventbiotech
每个孔至少要10-15ug,如果目标蛋白在总蛋白中丰度低,还需要加大上样量。重要的是总蛋白样品制备时蛋白没有丢失,否则上再大量的蛋白样依然是检不出。尤其目前大部分总蛋白的制备用RIPA来制备,其实ripa只提取RIPA可溶性蛋白,ripa提取总蛋白丢弃部分还是有很多蛋白的,细胞核和细胞器以及细胞膜上的蛋白大部分因为不能溶解在RIPA裂解液里,所以这些组分大部分会在RIPA不可溶性组分里。总蛋白提取
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问
请教测组织的hif-1a蛋白
Eason老歌迷
跑wb就有几个比较关键的步骤,一个是一抗二抗的选择。然后就是你转膜好不好,可能是时间没掌握好就跑过了,没转上。或者是你抗体的孵育有问题。
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问
ip实验中收细胞前加MG132的目的是什么?什么情况下可以不加?
天雨心晴
看你的实验目的了。因为高浓度处理时间长了,细胞会大量死亡。
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