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问
CRISPR CAS9质粒 T7E1 sanger sequencing TAcloning
bamboopiggy
你可以直接梯度稀释,铺96孔板,挑单克隆。然后得到目的细胞。 只要有knock out T7E1 就能切出条带。你这么混着,送测序,绝对是套峰
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问
我做的是小鼠海马组织,4度生理盐水灌注,4%多聚甲醛灌注,沉糖.OCT包埋,-20度切片,但是细胞大部分有空洞
balalaLy
一般说速冻是把组织放进液氮中速冻,我试过,效果并不理想。有同学建议用防冻液可以很好地防止冰晶产生,不会有空洞。你可以试试。
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问
所有WB实验都用总蛋白就可以完成吗?
balalaLy
大部分蛋白是只需要看总蛋白,有些蛋白失活、激活状态分别在不同的地方表达,就得看总蛋白和活化部分的比例,比如NF-kB需要看入核部分和胞浆部分。
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问
请问石蜡切片中所使用的二甲苯是哪一种呢?
bamboopiggy
就是最普通的二甲苯,一般500ml一瓶的那种
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问
大鼠视网膜色素上皮细胞
Eason老歌迷
你刮下面后用胰酶消化,可能时间长短不对,胰酶消化过度容易导致细胞老化,不贴壁。
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问
不同酪蛋白酶联免疫试剂盒,除了标准品不同外,α和β酪蛋白试剂盒中其他试剂可共用吗
whilt-shirt
理论上是可以共用的,但是要看这些试剂是否一样,最好混一起后再用
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问
细胞生物学问题
whilt-shirt
你这种情况可以试一下胰酶,或许会有效果
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问
紧急求救 流式测凋亡
balalaLy
细胞太密会影响药物的效果,建议还是重新铺板吧
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问
求大神指点
Eason老歌迷
可能是炎症吧,你不是用dss诱导结肠炎吗?
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问
求助丨目前在做多种菌的亚单位疫苗研究,求助做攻毒保护率实验的问题
Eason老歌迷
攻毒保护率实验是几种菌分别攻毒。分别攻毒的话,需要间隔一天。
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问
向各位大佬求助,我养的原代小胶质细胞,为什么总是很容易就飘了啊?
balalaLy
可能是消化的方法以及培养条件不是很适宜。
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问
三聚体蛋白疫苗含有少量同种单体杂蛋白是否会影响免疫效果?
Eason老歌迷
可能会影响免疫效果,因为它它可能会发生拮抗或者协同作用。
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问
如何同时采集得到血清和血浆
balalaLy
如果你是想从同一管血样品中得到血清和血浆,是不行的,只能分开抗凝管和非抗凝管采集。
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问
GEO数据库做出来的差异分析LogFC怎么都是NA
Eason老歌迷
出现NA就表示这个数据丢失了。
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问
求助!AG490给小鼠腹腔注射的给药剂量
Eason老歌迷
你可以做一个预实验,测试一下最适浓度。当然你如果没有时间和经济做这个前期实验,你可以取文献里的均值作为你的注射量。
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问
GTEx数据库打不开
Eason老歌迷
国外的网站有时候会打不开,你可以翻墙,虽然我不太推荐,但是为了学习和下载资源,只能挂vpn了
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问
想咨询一下各位老师,想要接种人的新鲜内膜组织,组织运输到实验室需要一个小时,用什么保存液最好?可以用生理盐水或者PBS溶液吗?
Eason老歌迷
可以用专门的组织保存液。组织和细胞在低温条件(2-8℃)下可保持形态结构和功能活性至少72小时,保存和运输的组织细胞可用于单细胞测序。
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问
请问灌注后的小鼠做免疫荧光和HE染色的冰冻切片,可以直接液氮速冻后进行OCT包埋吗?不经过脱水处理
balalaLy
常规做法是脱水后放入OCT包埋,冷冻,组织直接放液氮很容易碎。如果怕有冰晶引起片子有空洞,可以使用一种防冻液(具体什么名忘了),做脑组织切片的同学很喜欢用,说效果很不错
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问
为什么蛋白纯化后分子量变小了?
Eason老歌迷
这个属于正常,纯化后有洗脱,浓度更纯,可能分子量就变小了。
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问
3’5’race具体操作步骤与原理
Miracle星
3′RACERACE的实验样本包括总RNA,poly(A)+RNA等。首先根据mRNA3′末端天然存在的Poly(A)尾部设计反转录引物逆转录获得第一条cDNA链。根据已知的cDNA序列设计基因特异性引物(gene specific primer,GSP)合成第二条cDNA链。随后以基因特异性引物(GSP)及正义链3′末端引物作为一对引物,对得到的cDNA链进行PCR扩增,从而得到cDNA的3′端
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