实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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细胞

问TRUST试验中VDRL抗原包含哪些成分？各起什么作⽤？

天一湖医者

心磷脂:与反应素结合: 卵磷脂:加强心磷脂的抗原性:胆固醇:增强抗原的敏感性。三者按适当比例配制的乙醇溶液。EDTA 防止抗原变性(半年内)，氯化胆碱灭活待检血清中补体。

1 回答300 围观

问请问用CCK-8测定细胞增殖率过程中，饥饿处理后加入药物进而检测添加药物后不同时间点的细胞增殖情况，饥饿点如何确定？

bamboopiggy

饥饿的时间点取决于你什么时间饥饿，什么时间加药物，需要根据你的药物来确定。

3 回答487 围观

问内参actin灰度值总是不齐是为什么呢？总是两边的条带更深，中间几条条带更浅

bamboopiggy

感觉是你转膜的原因，转膜的夹子中间可能松了，所以转过去的少

3 回答2009 围观

问PCR跟WB验证同一个靶点问题

inventbiotech

结果不一定一致，从转录到蛋白还有很长的路，各种调控，PCR检测mRNA高了，蛋白未必就会高，两种调控系统，当然如果是外源表达的可能一致性还是有的，受内部调控低两者可以一致

5 回答1670 围观

问求助/fluo-8am染料会淬灭吗？

Eason老歌迷

会。光照射是致荧光淬灭的最常见原因，光照射也会促进激发态分子与其他分子相互作用而引起碰撞，使荧光淬灭。溶剂种类、pH值及温度等环境条件的不同也会让淬灭发生。

1 回答348 围观

问求助细胞培养

Eason老歌迷

不是细胞污染，我感觉像是一层死细胞。

4 回答351 围观

问颗粒细胞

Eason老歌迷

如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,

1 回答415 围观

问A549细胞形态判断，用于TGF诱导EMT

Eason老歌迷

不太好，怎么感觉里面细胞老化挺多的呢？

2 回答839 围观

问心肌细胞的形态对吗？

Eason老歌迷

细胞形态变了，可能是所用的培养液用的时间太久,里面的必须营养成分谷氨酰胺缺失------配制好的培养液在4度冰箱放置两周后,大部分谷氨酰胺就已破坏,在缺少谷氨酰胺时会出现细胞生长不良等现象。以前我养的细胞也出现过纤维化变脏等现象,我换成新鲜培养基后它就变好了。也可能是PH值不合适。比如原来生长条件是一个PH,现在改变较大。还有可能是传代时细胞密度太小.有些细胞在相互接触状态下长得比较好。

2 回答432 围观

问求助 | 给药之后p-Akt变化不明显，t-Akt表达减少明显

Eason老歌迷

我也遇到过，实际实验和预想实验结果不同，甚至相反，建议你多做几个重复，看看是不是偶然事件。

2 回答486 围观

问滑膜成纤维细胞培养1w+视野里是啥

Eason老歌迷

可能是胶原纤维。半月板损伤后滑膜细胞，成纤维细胞，间充质细胞，沿裂隙边缘充填，以肉芽组织形式修复，在一定生物应力作用下变成致密原结缔组织，部分成纤维细胞转化成软骨细胞，细胞合成分泌胶原蛋白，糖蛋白类复合物，形成胶原纤维和基质。

1 回答364 围观

问ECL检测后胶片显影之后曝光，胶片上面没有蛋白，原因有什么啊，压片10min，显影定影2min，胶片上什么也没有

inventbiotech

先确认蛋白是否转到了膜上，转膜后用丽春红染色可以检验，转膜后的胶可以用考马斯亮蓝染色，看看胶上是否还有蛋白，通常情况下，胶上还有蛋白的概率是很大的。每一步都有质控步骤，然后推导，找到原因是关键

4 回答387 围观

问目标蛋白大小在15-20KDa，半干法转膜55min，转完膜的胶用考马斯亮蓝染色发现蛋白还在胶上，但是marker已经转到膜上了

inventbiotech

转膜液很关键，转膜液这么小的蛋白SDS还是要控制量，转膜液选好了之后，转膜时间，选一个彩色maker做标志，但是maker过去了蛋白不一定过去，但是marker没过去，蛋白一定没过去

4 回答485 围观

问一直长不出噬斑，有无懂行大佬了解此类情况

Eason老歌迷

所用细菌是否正确？也就是是否是lamda噬菌体的宿主菌。NZY top是否够好？温度太高？浓度也就是营养不行？PH对么？培养时间是否足够长？培养温度是否合适？噬菌体活力是否够，也就是文库保存不当的话，噬菌体已经没活力了。测测，增大噬菌体的量再培养看看。培养的时候，适当将噬菌体和宿主菌先放37°孵育半小时，也许会好一点，增加粘附，侵入。

1 回答735 围观

问为什么我的细胞提取液中没有检测到目的蛋白？

inventbiotech

首先要考虑你的目标蛋白，他是在细胞的什么位置表达，是内源表达还是外源表达，丰度如何，外源表达要考虑他是否表达了。就是确认你的蛋白在你的样品里。再考虑蛋白提取的问题，目标蛋白没检测到，可能是蛋白提取时没提取到，这样就肯定检测不到了，你的目标蛋白如果是内源的，估计丰度不高，还可能不定位在胞质这些普通蛋白提取方法可以搞定的，可以考虑柱式法总蛋白提取。还有如果是丰度低，可以考虑针对目标蛋白所在亚细胞位置，

4 回答334 围观

问为什么WB蛋白的杂带很多？

dxy_lgbve3zq

两个原因，可能是蛋白降解或者抗体浓度太高，特异性不强。解决办法是尽量冰上裂解，提出蛋白以后立刻煮蛋白使蛋白变性。另外可以适当调整抗体浓度，孵育时间，抗体不好的话需要更换抗体。

5 回答1209 围观

问分离胶中忘记加没加SDS会不会有什么影响？浓缩的加了

inventbiotech

，理论上是应该跑不动蛋白在里面，不要冒险，重新配一块比较好，做一次不容易，忘记了就重来吧，建议配置时，加一样在实验记录本上划一样，就记不错了，好记性不如烂笔头。

4 回答1567 围观

问分子量小于10KD，western blot一直跑不出来，而且膜很扭曲

inventbiotech

分子量小的蛋白WB不好跑，一个是因为蛋白提取时容易提取不到，发生丢失。再加之跑电泳，转膜这些过程他也很容易丢失，太小了，电泳跑得快，转膜也跑得快，但是这一切都得是在提取蛋白时，提取到了这些小蛋白，建议使用不容易发生蛋白丢失的柱式法总蛋白提取技术进行蛋白的提取

5 回答845 围观

问样品较小如何提高蛋白得率。

whilt-shirt

可以选择高通量组织研磨仪，提取率高且快速

4 回答378 围观

问如何检测高丰度蛋白中的低丰度蛋白

李金喜

LC／MSn分析为鉴定复杂混合物中的蛋白质提供了强有力的手段。安捷伦的蛋白质组学解决方案（内流蛋白组学解决方案(Nanoflow Proteomics Solution)）将先进的纳流HPLC和离子阱MSn完美地结合以来，开创了分离和鉴定低浓度蛋白质的快速解决方案。

3 回答700 围观

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