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蛋白水解度测定,如何操作?
天一湖医者
蛋白水解度测定,常用方法是茚三酮法,利用待测蛋白样品完全水解液做为茚三酮比色的标准样品测定蛋白质的水解度。 水解度( Degree of hydrolysis,DH)代表水解过程中蛋白质肽键被裂解的程度,常用百分数来表示:DH =h/htot× 100%式中,h是水解后每克蛋白质被裂解的肽键数,毫摩尔数(mmol/g)。htot是每克原蛋白质中的肽键毫摩尔数(mmol/g),注意,当蛋白质特指时h
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问
蛋白三维建模,相关求助?
Eason老歌迷
某个基因某处发生了6个碱基重复,导致氨基酸序列中的2个氨基酸重复,这样可以三维建模说明致病性。
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问
求助重组蛋白的酶活性测定问题
天一湖医者
如果你有正确构想的有活性的高纯度酶,可以将你重组表达的酶和有活性的酶做个CD 看它们的高级结构是否一致!如果没有有活性的酶,很难知道你表达的酶的构想是否正确,即便是知道他的AA序列。一般的高级结构预测软件是在已知AA序列的情况下预测它可能的三级结构,与该实际的存在形式没有直接联系
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问
酵母双杂交,蛋白互作?
Eason老歌迷
是不是你的转化率太低啊?)检测感受态细胞效率,标准操作规范。 注意质粒使用量,检查仪器状态。重新配制新鲜培养基,并做对照转化。
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问
蛋白纯化时发现沉淀出现问题?
Eason老歌迷
硫酸铵沉淀是很粗的分级方法,建议你精纯的话还是要过柱子的。
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蛋白在纯化时,如何定量?
Eason老歌迷
蛋白质含量方法常见的有以下四种。根据物理性质:紫外分光光度法。据化学性质:凯氏定氮法、双缩脲法、Folin-酚试剂法(Lowry法)、BCA法、胶体金法。根据染色性质:考马斯亮蓝染色法、银染法。根据其他性质:荧光法。我们实验室更喜欢用考马斯亮蓝染色法。
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问
深色样品的多肽得率测定?
Eason老歌迷
试一试三氯乙酸法,我感觉挺好的
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问
帮忙判断是否污染,Hela贴壁细胞镜下有很多不明小点
天一湖医者
应该是支原体污染,可以看到细胞中有很多空泡样改变。
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WB上样时,直接从孔里漏到两个胶交接的地方
bamboopiggy
是你上层胶没有凝固好吧,一般上层胶的凝固速度,要比管里剩下的胶要慢一些
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问
基因敲除结束后再进行回补,获得的回补菌株没有恢复到原先的水平怎么解释?
Eason老歌迷
要特别注意做回补的时候,移码突变的必须要做cDNA突变,就是同义突变,将CRISPR识别的PAM序列去掉才行,要不然,回补的cDNA也会被切割破坏掉。注意移码突变的过程中,有一定概率出现的WB背景杂带的问题比较麻烦。回补之后的序列可能会干扰到回补片段的表达鉴定。
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问
请问细胞在无血清高糖培养基环境中合成酪蛋白的时间大约能维持多久?
Eason老歌迷
这个要看你的细胞数量和状态,一般高于24h。
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问
在疫苗生产中红细胞凝集试验(HA)是主要检测抗原血凝价是否符合要求的诊断方法吗?
Eason老歌迷
在疫苗生产中红细胞凝集试验(HA)是主要检测抗原血凝价是否符合要求的诊断方法,已经在大中型企业及实验室工作中广泛应用,它的结果直接关系到疫苗的质量。
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问
神经干细胞具有多向分化和更新的潜能吗?
Eason老歌迷
具有多向分化和更新的潜能。干细胞是存在于机体内的一类具有无限自我更新复制以及多向分化潜能的细胞群体。
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问
zea Longa评分法是在拔栓前还是拔栓后
Eason老歌迷
一般是插完2个小时,拔出线栓大概1cm后,就可以评分了。
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问
如何添加CUMS噪声和电刺激?
Eason老歌迷
有专门的实验仪器,每个牌子的设置都不太一样。拿我们实验室的来举例吧,需要电流、电压:0.1A,36V,设定放电刺激T1时间为10秒,间隔T2时间为5秒,自动循环刺激。设置方式如下:按下刺激仪上方红色按钮,手动调整电流,到0.1A,再次按下刺激仪上方红色按钮,手动调整电压到36V。长按设置键,再按动上下键,模式调整到P-6,短按设置键调整T1时间到10,再次短按设置键,调整T2时间到5,再次短按设置
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问
原代成纤维细胞传代后 飘了好多 黑色团块 培养基清澈 但仔细看有流沙样
Eason老歌迷
感觉还是传代时消化过头,以至于细胞老化(胞浆出现明显黑色颗粒是细胞老化的标志),现在我采取的消化传代方法是:1,先用PBS细两遍,以去除残余血清对胰酶消化的影响2,加适量胰酶(以能铺满瓶底为宜),镜下观察见饱体回缩时即倒去胰酶3, 利用剩下的一点点胰酶再消化,此时可以放入37度温箱中4,隔半分钟到一分钟将细胞拿出,侧拍瓶壁(用力),镜下可见细胞基本都已掉下来,此时可以加含血清培养基中和,再用吸管吹
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问
蛋白质和壳聚糖静电结合
Eason老歌迷
它两都发生反应形成复合物了,肯定在280的吸光度下降啊。壳聚糖的游离氨基与蛋白质羧基端的游离羧基在相关酶的催化下脱去一分子水形成肽键,形成以壳聚糖为辅基的蛋白质或壳聚糖-蛋白质复合物。
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问
碱性磷酸酶染色不上色是怎么回事呀
Eason老歌迷
你可以试一试偶氮偶联法。方法很简单: 固定,4%PFA 15min RT,1XPBS洗涤,后即可加染液,染液的配方: Fast red 25mg,a-磷酸萘酚钠 5mg,10%Mgcl2 0.3ml,4.5%Borax液 5ml,dH2O 44.6ml。然后室温孵育,镜下观察结果,待达到理想染色后即洗涤。
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问
小鼠是否为口腔黏膜炎?还是呕吐?
olaf闰闰
液体量很大,而且呈黄色,应该是出现了呕吐
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【求助】阿霉素大鼠肾病尿蛋白定量
olaf闰闰
小鼠造模不稳定的问题,分享几个个人经验和看法:1. 从饲养开始就必须要统一居住条件,保证水粮和进食时间一致,如果独居就都独居,群居就都群居,最好可以在spf养2. 鼠的数量最好尽可能多,这样可以每个组排除数值最高以及数值最低的两个鼠,去除个例,稳定数据。3. 给药是否都给进去了?造模的过程也要统一稳定,如果这次造模差异太大,看看是否有其他方法,或者找一两个手法娴熟的师兄师姐帮忙看一下造模过程~以上
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