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p-smad2蛋白WB结果出问题求助
whilt-shirt
这种情况有可能是转膜没转好导致的
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问
重组蛋白可以用于大鼠蛋白过表达吗?
Eason老歌迷
可以的,重组蛋白可以用于大鼠蛋白过表达。重组蛋白和腺病毒转的区别就是,重组蛋白是应用基因重组技术,获得连接有可以翻译成目的蛋白的基因片段的重组载体,之后将其转入可以表达目的蛋白的宿主细胞从而表达特定的重组蛋白分子。
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问
求助PI3K/AKT/mTOR相关问题
Eason老歌迷
刚开始做最好不要太复杂。不可以只检测PI3K、AKT、p-AKT、mTOR。后续还有敲低,过表达双向验证,你这个思路是挺好的。
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问
高氧细胞造模求助!
Eason老歌迷
之前没有高氧仓时我们也是用过氧化氢来造模的,一般浓度不要太高,你可以是加药时间不对细胞就容易死。
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问
流式平均荧光强度
Eason老歌迷
负数是做Logicle转换之后出现的正常现象,要出现,也是出现在阴性群。锁以,不知道你比较阴性群的目的是什么?但用负数来比较一个结果,是不太好看。所以,如果你要比较一个标记的表达强度差异,无论如何,即使阴性,也总得让它出现在较强的区域,将电压调高一点即可。更不用说很多标记,都会比对照要强,只要电压不要过低,都不会存在你所说的问题。
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问
要做细胞周期实验,老师说必须要有阳性对照组,但我查了很多文献都没有写阳性对照组
Eason老歌迷
需要的!这个高分sci都有阳性对照,一般阳性对照是用一种效果明确的手段来检测结果的有效性。
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问
PC-3前列腺癌细胞培养
Eason老歌迷
我觉得F12养的挺好的啊!推荐F12K培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%
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问
如何全面地了解一个基因?再向某个方向深入调查?
Eason老歌迷
先上ncbi网站搜这个基因,里面的东西很全,我觉得够你学。
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问
想做egfrvlll 胶质瘤免疫构建人源还是鼠源的?基因差异大吗
Eason老歌迷
我觉得你可以构建鼠源的,这个好构建些。基因差异不是特别大。
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问
基因富集
whilt-shirt
一般至少都几十个吧,少了的话结果不太可靠
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问
这种克隆形成的板子能用吗?
balalaLy
水印的问题不大,但是你这个已经15天了克隆数太少了,而且还聚集在孔板边缘,你可能需要增加铺板细胞数重新做。
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问
Flowjo作图,如图所示,怎么把两个峰的高度调成差不多的。已经用了down sample插件,没有成功,求指导
Eason老歌迷
如果没有明显的双峰分布,或者你想把两个峰的高度调整成差不多的,可以在在设门界定阴性群和阳性群的时候:应使用区域门进行设门,阴性群和阳性群之间的距离要尽量远一些,阴性群不要包含极低值区域,阳性群不要包含极高值区域。
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问
三色预染蛋白marker是怎么用染料上色的?怎么选择合适的染料呀?求指教?
秋秋欣欣
预染蛋白Marker是一些纯化好的蛋白混合物,通过与染料共价耦联,在电泳过程中或者转膜时可以直接观察到。
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问
问一下关于自噬的问题
balalaLy
自噬在不同干预后不同时间点会有不同的表型,建议你做多几次重复实验,如果重复性好,就以自己的实验结果为准。
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问
滤膜选择问题
Eason老歌迷
混合后带有机溶剂的一律过有机膜!
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问
做PTH项目,检测值太低了
Eason老歌迷
可能不是抗体的问题,可能是它的表达量本来就很低。
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问
Elisa检测时,本底值偏高,但是标曲的最大值偏低是因为什么?
Eason老歌迷
可能有几个原因。一个是粉末标准品没有充分溶解。二是标准品反复冻融。三是孵育时间和温度没有掌握好。四是显色时间要控制好。
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问
上周蛋白浓度要不要调一致?
秋秋欣欣
最好是调成一致,结果才能达到半定量
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问
双向免疫扩散试验滴定抗体的效价时,沉淀线位置也遵循抗原抗体浓度的原则么?
Eason老歌迷
双向免疫扩散试验滴定抗体的效价时,沉淀线位置也遵循抗原抗体浓度的原则。将抗原和相应抗体分别加入同一凝胶板中的相邻小孔中,使两者互相扩散,当扩散到它们的浓度达当量点时(浓度相当)形成沉淀线。如果抗原-抗体的浓度合适时,沉淀线在两孔的中间。如抗体过量,沉淀线靠近抗原孔。如抗原过量,沉淀线靠近抗体孔。
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问
在第2向电泳中,为什么我的溴酚蓝条带都跑到玻璃板下缘了,而蛋白质只跑了一半啊?
Bnight
1、电泳缓冲液的问题:换用新鲜的电泳缓冲液2、分离胶内浓度不均:灌胶的时候胶要混匀3、分离胶凝固不均一:如玻板没洗净,玻板在灌胶前用吹风吹干时没冷却就灌胶
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