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问
酵母载体克隆表达zeocin抗性表达与amp抗性表达问题。
bamboopiggy
加zeocin,amp是你扩增这个质粒,在大肠杆菌里面的时候用的抗生素,而转入酵母之后,用zeocin进行筛选
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问
粪便保存问题
bamboopiggy
你可以试一下,但是感觉是被破坏掉了,下次加pbs重悬以后,就别放-20保存,要不就加点甘油再放-20冻存
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问
小鼠的肝脏原代细胞怎么贴壁?
Eason老歌迷
向获得的小鼠肝细胞沉淀中加入1ml DMEM培养基(含10% FBS)后,混匀,用细胞计数板计算细胞浓度,按接种密度为2×105个/ml立即接种于预包被有大鼠鼠尾胶蛋白的六孔板或细胞培养皿中。每个培养皿所加培养基以视培养基厚度为1.6~1.8mm为准,于37℃ ,5% co2细胞培养箱中培养,2h后细胞贴壁,吸弃上清,加入1ml DMEM培养基(含10% FBS) 小心洗涤未贴壁细胞, 再加入DM
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问
孕激素受体亚型B在NCBI上应该输入什么进行搜索找到该基因序列?
whilt-shirt
孕激素受体 B 亚型的英文全称是Progesterone receptor B,检索这个就行
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问
RNA提取后跑电泳发现加样孔发亮是有蛋白污染吗?该如何解决,已少取上清
bamboopiggy
蛋白污染,你加氯仿以后,吸上清的时候,就吸400ul,足够提rna了,这样接触不到那个蛋白质的小白片。
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问
【求助】做细胞TUNEL实验时忘记稀释5×TdT酶缓冲液了,怎么办?
bamboopiggy
建议重新做一次,做之前写好protocol,按步骤做
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问
NR8383细胞培养
whilt-shirt
是不是血清浓度低了,可以适当增加血清浓度试试
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问
NEST 15厘米培养皿
balalaLy
有可能是你铺板之后培养皿没有放平,高的一侧没有培养液或培养液较少。
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问
绵羊前体脂肪细胞的诱导分化
bamboopiggy
你传代几次以后,再看看速度如何,一般刚复苏的细胞,状态会稍微差点
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问
hela贴壁细胞疑是染菌,求大神帮忙判断一下
Eason老歌迷
你可以先用显微镜观察,它有没有游动,培养基有没有混浊。我觉得可能是黑胶虫污染。
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问
高尔基染色沉糖
Eason老歌迷
前两天看你问过这个问题,你的实验还没出结果吗?鼠头沉降与否对于实验结果并没有太大影响。
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实验小白求助
Eason老歌迷
文献中出现的动物给药浓度,是根据片剂药物的有效成分计算的,而不是直接根据片剂药物的重量计算的。
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问
冰冻切片做免疫组化出现黑黑的杂质
whilt-shirt
有可能是残留的试剂,建议降低抗体浓度试试
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问
小鼠肝脏HE染色求助
Eason老歌迷
染色不均匀的话,可能有几个主要原因。一是组织取材固定不当,如组织取材过大或过厚,不能将组织完全固定,组织切片染色后出现外周固定好的部分易着色,而中间未固定好的组织 ,细胞着色模糊,使染色不均。二是切片薄厚不均或有横纹。三是组织脱水,透明和浸蜡处理不当,组织脱水用的各级乙醇未能保证相应浓度使组织脱水不彻底,二甲苯内的时间过长组织易碎也无法切出好片子,浸蜡温度过高,组织变脆也不利切片染色。
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问
成肌细胞C2C12分化成功后,是用马血清继续培养呢,还是再换成胎牛血清培养
bamboopiggy
诱导分化成功了,就可以换成胎牛血清了,因为此时已经是肌细胞了。
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问
请问大神这是什么污染
bamboopiggy
没看出细胞污染来,可能是细胞密度太大,所以有死细胞,如果细胞增殖出现问题,可以检测一下支原体试试
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问
表达的GST蛋白一直不挂柱,无法纯化
bamboopiggy
先确定你确实表达出了GST蛋白,如果一直不挂柱,感觉是gst没表达出来
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问
最近在做毕赤酵母蛋白诱导,总是失败?
Eason老歌迷
可能是有几个原因。如果用GS115表达不出蛋白,我们换成KM71H后,大部分克隆能表达。 我们尝试过在28度和室温下诱导表达,表达水平可能都不低。ph的话就选择用6.0——6.8,BMMY的pH7.0-7.5比较合适。
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问
膜蛋白的提取以及如何做IP?
dxy_c1z3mp3
取决于蛋白特性,具体蛋白具体分析,tween triton sds 尿素,另与之相互作用的蛋白是可溶不可溶都需要考虑,高盐变性是否会影响其蛋白互作结果,另也可以考虑全长中的亲水片段
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问
求助菌液浓度测完做标曲,如何判断公式能不能用
dxy_c1z3mp3
R2要接近1才行,你算出来R2太小是因为稀释倍数不够,多做几个点,找到R2最接近1的那一段才能当标准曲线
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