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问
细胞培养基里的分泌蛋白怎么提取?提出来以后还要加到另一个细胞培养基里
天一湖医者
将要浓缩的蛋白溶液放入透析袋(无透析袋可用玻璃纸代替),结扎,把高分子(6 000-12 000)聚合物如聚乙二醇(碳蜡)、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可.也可将吸水剂配成30%-40%浓度的溶液,将装有蛋白液的透析袋放入即可.吸水剂用过后,可放入温箱中烘干或自然干燥后,仍可再用.
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问
WB目的蛋白底下出现一条非常强烈的条带
天一湖医者
有可能是因为多克隆抗体,特异性不强。识别其他蛋白含量比较多的蛋白,所以非目的蛋白颜色就比较深。
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问
Qpcr中如果有基因组dna污染可以通过曲线看出来吗
whilt-shirt
可以在跑完qPCR后跑一下琼脂糖凝胶电脑看看有没有污染
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问
PI3K/AKT/mTOR信号通路 WB求助
Eason老歌迷
有几个原因。一个是PI3K/AKT/mTOR信号通路这个是存在磷酸化的,我觉得你在提蛋白的时候需要加磷酸化抑制剂。二个是你可以跑个18s看看,我觉得大概已经出来了有几个下调的,整体上抑制这个通路。
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问
wb:500多kda的大分子怎么跑
天一湖医者
选对凝胶很重要 3种最常见的凝胶包括Tris-Glycine, Bis-Tris and Tris-Acetate. Tris-Glycine凝胶的PH为8.6,且保质期很短。在跑胶的过程中,PH还有上升的趋势,可达到9.5。这会导致蛋白降解和低分辨率。 Bis-Tris凝胶的PH为6.4,相对Tris-Glycine凝胶,稳定性和保质期都有所增加。但这种凝胶需要在溶液中增加抗氧化剂,比如DTT
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问
小鼠的肝脏原代细胞怎么贴壁?
Eason老歌迷
向获得的小鼠肝细胞沉淀中加入1ml DMEM培养基(含10% FBS)后,混匀,用细胞计数板计算细胞浓度,按接种密度为2×105个/ml立即接种于预包被有大鼠鼠尾胶蛋白的六孔板或细胞培养皿中。每个培养皿所加培养基以视培养基厚度为1.6~1.8mm为准,于37℃ ,5% co2细胞培养箱中培养,2h后细胞贴壁,吸弃上清,加入1ml DMEM培养基(含10% FBS) 小心洗涤未贴壁细胞, 再加入DM
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问
为什么western的内参调齐了一次之后,再按齐的上样量跑actin又不齐了
yanlai000
确定上样量一致,转膜条件一致,换配胶方式有可能会有这种情况
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问
WB出现奇怪的线性条带
麻黄连翘赤小豆
多克隆抗体也可能这样,特异性较差
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问
【求助】做细胞TUNEL实验时忘记稀释5×TdT酶缓冲液了,怎么办?
bamboopiggy
建议重新做一次,做之前写好protocol,按步骤做
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问
NR8383细胞培养
whilt-shirt
是不是血清浓度低了,可以适当增加血清浓度试试
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问
绵羊前体脂肪细胞的诱导分化
bamboopiggy
你传代几次以后,再看看速度如何,一般刚复苏的细胞,状态会稍微差点
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问
高尔基染色沉糖
Eason老歌迷
前两天看你问过这个问题,你的实验还没出结果吗?鼠头沉降与否对于实验结果并没有太大影响。
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问
【求助】电镜大组织块固定太久
bamboopiggy
能切,但是最好用靠近戊二醛的外层的,怕内层的渗透不好
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问
WB.结果分析
whilt-shirt
应该是数据之间差异比较大,建议调整曝光时间使条带颜色差不多试试
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问
表达的GST蛋白一直不挂柱,无法纯化
bamboopiggy
先确定你确实表达出了GST蛋白,如果一直不挂柱,感觉是gst没表达出来
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问
求助!有人知道这种能分离单个碱基的电泳是怎么跑的吗
yanlai000
RFLP把,限制性内切酶片段长度多态性
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问
膜蛋白的提取以及如何做IP?
dxy_c1z3mp3
取决于蛋白特性,具体蛋白具体分析,tween triton sds 尿素,另与之相互作用的蛋白是可溶不可溶都需要考虑,高盐变性是否会影响其蛋白互作结果,另也可以考虑全长中的亲水片段
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问
转录组学求助
yanlai000
那就网络药理学的思路么:找一个中药复方确定靶标,然后分析疾病的转录组学确定疾病genes,二者取交集找到中药对疾病的靶标,然后分子对接准确预约靶标。
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问
求助菌液浓度测完做标曲,如何判断公式能不能用
dxy_c1z3mp3
R2要接近1才行,你算出来R2太小是因为稀释倍数不够,多做几个点,找到R2最接近1的那一段才能当标准曲线
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问
抑菌率实验求助
麻黄连翘赤小豆
第一个问题回答不确定,做细胞基本都过筛或者灭活一下,做细菌的应该也要吧第二个问题回答一般血清做炎性因子我们都是直接取出来离心后进行Elisa ,不知道你是不是做这个的
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