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要提前一天先用促贴壁试剂或鼠尾胶原,或多聚赖氨酸处理皿底。
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向获得的小鼠肝细胞沉淀中加入1ml DMEM培养基(含10% FBS)后,混匀,用细胞计数板计算细胞浓度,按接种密度为2×105个/ml立即接种于预包被有大鼠鼠尾胶蛋白的六孔板或细胞培养皿中。每个培养皿所加培养基以视培养基厚度为1.6~1.8mm为准,于37℃ ,5% co2细胞培养箱中培养,2h后细胞贴壁,吸弃上清,加入1ml DMEM培养基(含10% FBS) 小心洗涤未贴壁细胞, 再加入DMEM培养基(含10% FBS),37℃,5% CO2细胞培养箱中继续培养,即可贴壁。
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肝原代细胞是很容易贴壁的,不过最好用I型鼠尾胶原铺个下胶