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wb总是两边泳道条带颜色浅。
Eason老歌迷
可能是转膜的时候夹子没夹紧,导致两边转膜不完全。
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求助大佬,跑肝组织stat6总蛋白和磷酸化蛋白趋势相反,这能解释的通吗?
bamboopiggy
有的时候,总蛋白会和磷酸化的蛋白变化趋势是一致的,看你的结果,可以总结为模型使stat6的磷酸化下降,而加药后,会抑制总的stat6的蛋白,但是会使磷酸化增高。来rescue
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问
求助|大家是怎么提组织样的总蛋白的?
bamboopiggy
1.你取了中肠以后,先用pbs洗一下,然后直接放入lysis(+cocktail)中,研磨,研磨过程中全程冰上放置。研磨完以后,冰上放置5-10min,然后再离心,然后再加上样buffer煮。2,如果还是做不出来,可以考虑用液氮快速快速冰冻,然后用研钵研磨,然后加入lysis,冰上放置5-10min,然后再离心,然后再加上样buffer煮。
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问
求助帖:slot blot 和dot blot的区别和原理
Eason老歌迷
斑点杂交dot blot是指将待测的DNA变性后点加在硝酸纤维素膜(或尼龙膜、NC膜)上,用已标记的探针进行杂交,洗膜(除去未接合的探针),放射自显影,判断是否有杂交及其杂交强度,主要用于基因缺失或拷贝数改变的检测。狭缝斑点slot blot,也是广义dot blot的一种。
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问
转染两个重链质粒进细胞会怎样?
Eason老歌迷
两种质粒混了没有影响。利用同一复制系统的不同质粒不能在同一宿主细胞中共同存在,两种质粒混了没有影响,只是不相容。利用同一复制系统的不同质粒不能在同一宿主细胞中共同存在,当两种质粒同时导入同一细胞时,它们在复制及随后分配到子细胞的过程中彼此竞争。在一些细胞中,一种质粒占优势,而在另一些细胞中另一种质粒却占上风。当细胞生长几代后,占少数的质粒将会丢失,因而在细胞后代中只有两种质粒的一种,这种现象称质粒
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酵母单杂交
Eason老歌迷
转化后如果是过夜就取出来的平板,菌落可能不会长得很大。主要还是要看放置一段时间后,菌落形态是否有变化(可以在37C继续培养,如果怕长过了,也可以放在室温下)。如果还是保持原来的状态,或者长出来更多的小菌落,则很有可能是污染。如果菌落明显在生长,而且透明度也变化了,应该是正常生长。另外,如果这一批菌生长速度明显低于平常,需要考虑是不是抗性加高了,或者IPTG加高了,抑制了菌的生长。最后如果形态与平常
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请问各位大佬有知道SaKKH ABE8e NG ABE8e的具体用法区别吗?麻烦指点一下!谢谢
Eason老歌迷
具体参看 Jennifer Doudna 在 Science 杂志发表了题为“ DNA capture by a CRISPR-Cas9–guided adenine base editor ”的文献,讲的很详细。
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问
huvec血管形成实验求助
Eason老歌迷
具体的方法如下,huvec细胞细达到80%汇合度后准备消化,一般过夜培养后的细胞状态更佳,收集细胞进行计数,并按照需求梯度稀释调整细胞的浓度,请一定保证细胞状态完好。24孔板加入200ul的huvec细胞悬液,浓度约为12-20万个细胞,建议做复孔;细胞加入后不应该移动培养板,放入37度孵箱约4小时左右即可进行观察血管是否形成。一般在15小时后成管会开始缓慢皱缩凋亡。第一个问题,在你细胞加入后,你
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问
肝纤维化造模
Eason老歌迷
一般造模方法是,成年雄性小鼠,按5ml/kg体重的剂量皮下注射20%CCl4茶油溶液,每5天一次,连续3个月。或成年雄性大鼠,皮下注射60%CCl4花生油溶液3ml/kg体重,首剂加倍,每周2次,共9周。它如果有胀气,我感觉可能是你皮下注射打到肠腔了可能。
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问
毛细采血管需要灭菌吗
bamboopiggy
毛细管采血一般不需要灭菌,如果要灭菌,可以在容器中加入一点点水,然后高压灭菌
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问
TCGA差异基因结果与细胞qP表达结果相反怎么办
bamboopiggy
tcga比的使癌和癌旁,你细胞系怎么比?有正常和肿瘤么?当然肿瘤里面高的基因,在癌细胞中不一定高,你可以多找几个癌细胞
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疑难求解答
bamboopiggy
确定阻断剂没有坏,用的浓度达到参考浓度,甚至稍微高一点。
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请问大家知道ncf后缀的文件用什么可以打开吗?
bamboopiggy
好像那个播放器叫ZzFlash ncf 1.1.0.2.exe,必须得用微软的视窗操作系统看。
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用山羊的cDNA为模板克隆,为什么blast结果会得到鹿的染色体?
jack劲
第一,你要在前面进行blast的界面,有一个选择物种的地方,手动输入自己物种。选择物种之后再进行对比这样一般没有其他的物种了。第二,确实有些基因组有一些相似性。你不能完全忽略。
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支原体培养
Eason老歌迷
解脲脲原体(UU)是耐酸不耐碱的,UU培养的原理是在于其菌体中含有脲酶,而UU培养基中含有尿素,UU的生长需要其本身的脲酶分解尿素益提供其自身生长所需要的营养物质,UU培养基中含有指示剂酚红,由于尿素被分解释放出氨从而使培养基变碱而使培养基由黄变红,但是这种红是一种清亮的红色,透明澄清无浑浊,UU其适宜的PH值为6.2-6.5,由于尿素分解产氨是PH上升,UU在PH值大于7的条件下会迅速死亡,因此
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流式细胞仪平均荧光强度
Eason老歌迷
机器不一样,单位不一样,所以结果也不一样,可以参考两个机器的说明书。
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颗粒细胞
whilt-shirt
理论上是可以的,但是注意胰酶消化过长会导致细胞活性减弱
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肿瘤细胞,流式,检测凋亡,BDC6流式细胞仪,试剂盒Elabscience
whilt-shirt
有可能是试剂原因,建议更换试剂后再试试
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想问一下有人做过灌注后心脏切片吗
bamboopiggy
小鼠死了以后,心脏的改变和活体不一样啊,活体取脑最好使做心脏灌注的。灌注后的心脏单纯切部分切片没问题,但是切四腔心,可能有问题。
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问
为什么我的常规PCR跑胶结果最下面有两条带呀,最下面那两条又是什么东东呢😂,我的目的基因是1000bp左右的
jack劲
应该是引物二聚体最下面的,会呈模糊状态。而另一个可能是相似的扩增出来的条带,你在设计引物前最好是去ncbi上比对一下这样就不容易扩增到其他条带。
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