实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问新手小白WB实验内参总是跑的不好？

Eason老歌迷

这个条带最好是别用，不太好。可能是你的电泳液使用次数太多。可能是你的抗体特异性不好，出现了非特异性条带。

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问如何提纯动物标本的目的大分子蛋白

cab2

我们取动物肝脏蛋白，用液氮把组织速冻，用pe手套包裹，用陶瓷杵敲碎，取适合大小的碎块，称重，1g加入1ml裂解液，加入3个钢珠，2大1小，研磨仪中研磨，离心，取上清

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问求助！！！免疫共沉淀洗珠子时的去污剂SDS浓度范围

balalaLy

我用的buffer的配方一种是1%NP40+0.1%SDS或者只有1%NP40

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问腺病毒纯化介质氯化铯梯度的配置浑浊？

Eason老歌迷

是不是溶剂的问题，你过滤一下试试看。

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问天根质粒小提试剂盒的PD溶液怎么配？

Eason老歌迷

去蛋白液PD，一般是含异丙醇（可能50%）和sds等去污剂的水溶液。但是人家试剂公司的试剂盒里的溶液应该不会告诉你具体配方吧。

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问人支原体培养防护及处理

Eason老歌迷

人解脲支原体和肺炎支原体培养需要在生物安全柜操作!在P2实验室，单纯穿白大褂和一次性使用平面口罩和手套可以。做完之后支原体培养基之类的需要全面消毒照紫外处理。

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问(求助) 有人在做基底膜体外培养的螺旋神经节神经纤维免疫荧光染色吗？求解！

balalaLy

我4年前有做过，NF200确实不好染，实在染不好，你可以考虑换另一个Marker，或者用Neun，丁大连老师有一篇文章就是染螺旋神经节的，你可以找来看一下。

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问请问现在有傻瓜式软件可以分析某个基因和肿瘤分期（TNM、Gleason评分）吗？

Eason老歌迷

我们实验室的师兄师姐都在用UCSC XENA这个。

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问会r语言的大佬看过来 ballball了

Eason老歌迷

这个是计算相关系数的方法你没有指定。

1 回答829 围观

问我的NLRP3有两个条带是怎么回事呀？

bamboopiggy

无图，只能靠猜，你是不是灌胶或者是buffer，有新配的？或者可能是你转膜的夹子有问题了？建议你重新跑一遍再看看。

3 回答289 围观

问内参的选择

Hatcher_Qin

BCA蛋白定量准确的前提下，一多一少说明UUO对你选的这个内参有影响，建议换其他内参。

4 回答446 围观

问细胞侵袭实验

balalaLy

那些一坨一坨的东西是死细胞，细胞穿不过去饿死了。可能是因为小室底下有气泡，接触不到下室的培养基。

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问外泌体超滤管选择

Eason老歌迷

使用100Kd超滤管浓缩细胞上清保留内管液体。我师兄发明的一种提取外泌体方法。如下:用含无外泌体血清的培养基培养细胞得到培养上清液，所述培养上清液中含有外泌体。进行第一离心处理后，取上清进行第二离心处理，然后取上清得到离心液；将所述离心液用100kd超滤管进行超滤浓缩处理，得到超滤液；将所述超滤液进行第三离心处理后，用0.22μm过滤器进行过滤除菌处理，得到浓缩液；将所述浓缩液进行第四离心处理，弃

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问小鼠主动脉平滑肌细胞系（MOVAS）动脉粥样硬化模型。

Eason老歌迷

小鼠主动脉平滑肌细胞系（MOVAS）动脉粥样硬化模型制作:1．动物 C57BL/6J品系小鼠，9周龄，体重20g左右为宜。2．饲料在基础饲料中添加棕榈油10％，牛奶粉4％，胆固醇2％，胆酸钠0.4％，混合磨碎制成颗粒，暴晒干燥，高温高压灭菌处理备用。喂饲上述饲料16周血清总胆固醇、游离胆固醇和甘油三酯浓度均可成倍增高，并在主动脉瓣膜和冠状动脉等部位形成典型的含大量泡沫细胞的As病变。3．特点应

1 回答553 围观

问可以帮忙解答一下胰腺组织取材吗

Eason老歌迷

有点像，我建议你下次连带着附近器官一起取，我们都是连带着附近的器官一起取下来，然后再进行分离，这样好辨别和分离。

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问CAR-T细胞改造

Eason老歌迷

因为CAR主要由三个功能域构成:胞外结构域、跨膜结构域和胞内结构域。胞外结构域由负责识别并结合抗原的单克隆抗体的单链可变片段（scFv）及一段起连接作用的铰链区（Hinge）构成，胞内结构域由共刺激结构域和信号转导结构域构成。所以说它在细胞内，不是在细胞表面。

1 回答600 围观

问关于实验配液的一些问题

Eason老歌迷

估计是没审核出来错误，25—ml，就是25毫升，0.2—ml就是0.2毫升。

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问中国免疫学杂志

Eason老歌迷

这都送外审了，就等消息吧，应该没啥事。

3 回答378 围观

问4T1尾静脉注射

Eason老歌迷

通过尾静脉注射，细胞量一般是 1 - 5 * 106 个/ 200ul。也可以通过皮下注射相同的细胞量。静脉注射转移的周期大概是 2 - 3 周，皮下注射转移的周期会增加至 3 - 4 周。你可以通过尾静脉或者皮下接种稳转 luciferase 荧光素酶，可以明显观察到荧光信号。

2 回答1700 围观

问小鼠肺灌注问题，请有经验的前辈解答！

Eason老歌迷

为了防止肺部塌陷，渗出，我们都一般用50ml的空针抽20ml的多聚甲醛，打进去，算压力20cmH20，我也在摸索，不知道行不行，以上就是我个人见解。

2 回答3156 围观

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