huvec血管形成实验求助

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压哨绝杀

2022-07-27

做了一次血管形成结果完全失败，有几个问题想请教:

1.胶怎么加入和处理能保证平整呢，镜下完全没有平整部位，甚至有地方都没铺到胶（感觉像加的胶不足，按50μl加的），是否一定要把整个底都铺满呢

2.如何操作能避免气泡形成呢，感觉每个孔都加出了气泡。。。

3.加入细胞数量问题，96孔究竟加多少合适呀，因为后续可能要transwell共培养，可能必须得改用24孔，那又要加多少呢

4.胶用之前究竟需不需要稀释呢，我这批胶蛋白浓度8.1mg/ml，我看到有文献说最好大于10。

其余想到再向大家请教，非常感谢

2 个回答

Eason老歌迷

2022-07-27

有帮助

具体的方法如下，huvec细胞细达到80%汇合度后准备消化，一般过夜培养后的细胞状态更佳，收集细胞进行计数，并按照需求梯度稀释调整细胞的浓度，请一定保证细胞状态完好。24孔板加入200ul的huvec细胞悬液，浓度约为12-20万个细胞,建议做复孔；细胞加入后不应该移动培养板，放入37度孵箱约4小时左右即可进行观察血管是否形成。一般在15小时后成管会开始缓慢皱缩凋亡。

第一个问题，在你细胞加入后，你就不能移动培养板，如果移动可能会造成不均匀。

第二个问题，加细胞悬液的时候，可能不要让枪头吹出气泡。然后细胞状态也要好，这样结果会更好。