实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问实验室如何通风？何时通风？

Eason老歌迷

实验室通风有几个主要方法，通风柜是针对实验室实验人员经常做实验的区域进行局部通风换气的方式，这种是局部通风方式：在生成有毒气体较集中的区域进行通风。而另一种是全面通风：对实验室整体进行通风换气的方式。实验室通风简单来说就是针对室内有毒气体的技术。按照通风动力又分为自然和机械通风，以上两种就是机械通风。

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问实验室的采光如何控制？可以有阳光直射吗？

Eason老歌迷

实验室避免阳光直射!实验室宜采用荧光灯照明，可减少炫目的光，且灯管温度较低，发光效率高，使用寿命较长。荧光灯镇流器应用隔热、不可燃材料与可燃性顶棚或墙面材料隔开，且应注意通风散热。需要恒温的房间，应将荧光灯镇流器装在室外。

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问菌落计数平板pca为什么会出现连片的菌落

你好几和户

那说明你涂平板时菌液浓度高了，要继续稀释。

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问targetscan搜索后Pct是N/A是怎么回事?

你好几和户

数据没出或者没填全，出现不能获得数据的提示

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问小鼠耳蜗基底膜毛细胞突触染色？

Eason老歌迷

谢谢分享，染的特别好看，我看你发了好几次图都特别好看。👍👍👍👍

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问免疫荧光染色细胞铺板

balalaLy

用1ml注射器针头把玻片挑出来，换一个孔

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问请问细胞产生的酪蛋白在进行饥饿处理过程中不同时间点，酪蛋白的浓度如何变化？

Eason老歌迷

细胞产生的酪蛋白在进行饥饿处理过程中不同时间点，酪蛋白的浓度变化为，先稳定不变，然后快速下降，最后稳定不变的s形曲线。

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问番茄红素标品用什么流动相跑，用的c18反向柱

你好几和户

色谱过程中携带待测组分向前移动的物质称为流动相。与固定相处于平衡状态、带动样品向前移动的另一相。 1、可以用丙酮。2、有的反相流动相还用DMF和乙醚。3、主要是看丙酮对你的分析有没有影响流动相为水或缓冲液,比如样品的溶解,常加入甲醇、异丙醇、乙腈、丙酮、四氢呋喃等与水互溶的有机溶剂以调节保留时间。

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问有什么办法可以提高蛋白提取浓度？

默然前进前行

用水提取蛋白质时,还应考虑盐的浓度、PH、温度等因素。如:PH 溶液PH影响蛋白质的溶解度和稳定性,蛋白质提取溶液的PH应首先在保证蛋白质的稳定范围,选择偏离等电点两侧的某一点,以增大蛋白质的溶解度,提高提取率等。

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问关于PLKO.1测序

balalaLy

多挑几个菌落试试，我试过一个板反复测了几次，最后才测成功

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问没有电转仪可以进行大肠的基因敲除吗？

冷泉港蛋白

1.首先我们讨论下，转化的原理：质粒是大分子，或者说很大，要想进入细胞，必须增加细胞通透性，细胞上面得有个大窟窿，进去之后还要立马恢复到正常状态2.除了电转，还有用化学转化的方法。你得制备感受态细胞，或者购买，再按照步骤进行。

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问脑室注射miRNA或siRNA微量注射器需要提前处理吗？

Eason老歌迷

需要提前处理!rna遇到rna酶直接就降解了。你可以先用外源RNA酶清除剂洗，然后在用无核酸酶水清洗，密封好，下次备用。

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问假病毒中和实验

冷泉港蛋白

重复分为技术上的重复和生物学意义上的重复，3个复孔是技术上的重复，就像QPcr实验要做3个复孔一样；生物学的重复是，同样的实验，不同的时间做3次。

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问脑冰切HE染色没有细胞形态，组织像海绵一样，求助

balalaLy

冰冻切片容易因为冰晶导致细胞破碎，组织形态会不好看，而且10ul有点太厚了，很难观察到单层的细胞。做HE、组化的建议用石蜡切片。

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问免疫共沉淀的图怎么看啊

冷泉港蛋白

一、免疫共沉淀的机理：1. 首先证细胞内存在这两个蛋白2. 阳性表明可能存在互作（实验组）3. 排除非特异吸附（对照组）：蛋白a b没有非特异吸附到磁珠和抗体的恒定区二、免疫共沉淀研究的几个层次1. 蛋白a和蛋白b是否存在互作（图上）2. 二者的关系，进行过表达（图下Flag）或抑制表达相关实验3. 是直接互作还是间接互作

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问蛋白原核诱导表达与纯化

冷泉港蛋白

问题是蛋白挂柱不好。两个因素填料和蛋白1.填料是否有问题，把镍剥离，再挂一次2.蛋白his暴露的不好，his超级小，容易被卷进去：A.看下his是在N端还是C端，B.更换不同体系缓冲液C.可以考虑两段都加个hisD.如果实在不行，换成gst标签

4 回答533 围观

问原核蛋白诱导表达

冷泉港蛋白

你的蛋白理论计算应该是20+46=66kd，1.上面的条带略高吧，也可以解释通。2.下面的条带应该是目的蛋白降解了，没有其他解释了，这个蛋白应该是超级不稳定。3.下面的条带如何证明是目的条带，抠胶打个质谱，花钱，也没有必要；纯化出来，37℃放置，第二天跑胶，估计就降解很多了4.如何解决这个降解问题，更换缓冲估计不行了，换载体吧

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问求助｜flag-beads是自带抗性吗？

bamboopiggy

对，flag-beads是自带flag抗体的beads，你只要binding完了，煮了以后，要先用flag的一抗去杂，加二抗显影就可以。

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问BrdU相关问题

冷泉港蛋白

1.BrdU是一种胸腺嘧啶核苷类似物。能够在细胞增殖时期代替胸腺嘧啶（T）渗入正在复制的DNA分子中。因此BrdU与A通过非共价键结合。2.该实验必须解链，但目的是为了将与A结合的BrdU暴露出来，就像握手，松开之后才能与第三者握手。和抗体大小没有关系，是为了暴露出结合位点。

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问做了原核表达，跑了SDS-PAGE但是看不出来差异，所以做了个WB但是全是非特异条带，是怎么回事

冷泉港蛋白

第一张图在100kd位置，是有条带表达的，表达量不高，但有第3张图，28a载体的标签是his，his抗体的特异性很差，所以不要用his去做wb确定是上清还是包涵体后，摇个大样，过下柱子

4 回答478 围观

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