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科研学霸天团,48小时有问必答
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问
IP实验中,为什么会结合出很多杂带
dxy_gwrp7ndq
可以通过更改NaCL的浓度以及去垢剂的比例,比如:针对单纯的IP或co-ip实验或者虽然是进行IP实验,但蛋白质之间的结合比较牢靠,可以考虑使用低浓度(0.2-0.5%)的SDS洗涤抗体-sepharose beads复合物,这样可以去除绝大部分非特异性相互作用。
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问
组织放在4%的多聚甲醛中保存放在-20度保存2个月,还能用吗?
府宅
使用4%的多聚甲醛可以固定标本不能超过48h,固定时间太久组织会变脆如果是在温度4°以下最多可以放一个月,但是肯定会损失抗原的
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问
免疫荧光:视野中细胞与细胞之间存在散在的发光点的原因有哪些?
dxy_gwrp7ndq
PBS 未过滤,未溶解的残渣黏附而导致
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问
组织样本无法及时进行免疫组化实验,怎么保存最好?
whilt-shirt
可以用组织保存液放-80保存。
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问
免疫荧光染色,非特异性染色太高,怎么解决呢?
balalaLy
封闭用好一点的封闭液,设置不加一抗的阴性对照,确保拍照的参数一致
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问
对于多色免疫荧光,是同时孵一抗,然后同时孵二抗,还是分开孵育?
whilt-shirt
一般是分开敷育的,这样效果会好一些
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问
做的流式细胞术结果总是和我们课题组预期的相反,怎么办?
whilt-shirt
是不是试剂有问题,换个试剂试试
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问
用流式做免疫表型分析不能立即分析,可以用甲醛固定后放冰箱过几天再染色上机吗?
Eason老歌迷
如果不能及时上机检测,可将已经染色的细胞在1-4%的多聚甲醛中4℃固定30min,清洗细胞,之后用适量的Stain Buffer重悬细胞,4℃避光保存。固定的细胞需要尽快上机检测一般不应超过72h。
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问
免疫荧光用PBS和PBST效果差别大吗?哪一个更好一些
天一湖医者
个人认为PBS还是要好一些,因为PBST里面含有HCL对实验肯能会有一些影响。做免疫荧光的话一般自己实验室配制的PBS就可以,细胞培养级别就是纯度更高一些,你用分析纯的试剂配制PBS完全可以满足实验的需要了!
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问
抗体是永久有效的吗?还是有一个有效期,然后是有有效期的话,那有效期是多久呢?
天一湖医者
抗体是不是永久有效的,每个有效期都不一样,具体要看抗体类型。
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问
细胞提取液有的有沉淀,有的很清亮,为什么呢?
balalaLy
沉淀可能是细胞碎片或者是核酸,离心后注意不要吸到就行
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问
Elisa的细胞上清液样品可以冻存后再用吗
天一湖医者
可以,Elisa的细胞上清液样品可以冻存后再用。
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问
请问小鼠眼球取血的量为什么总是很小?
麻黄连翘赤小豆
一般小鼠血量差不多0.5-1ML,眼球摘掉,用力挤压腹部和心脏,还有就是一旦眼球那边凝血,可换另一只眼球,或者用干净镊子把血块弄掉再挤血
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问
请问从人源PBMC中分选的T细胞亚群是需要现用现取吗?可否冻存或是否有稳定的细胞系呢?
此用户已注销
先从PBMC中分离得到淋巴细胞的混合物,然后用CD4+T细胞的单抗,免疫磁珠法分离;或者利用流式细胞仪进行分选。如果精确的话得用专门仪器了,要后续培养干扰小建议磁珠分,这个操作比较简单,对设备要求不高,如果是要纯度高推荐流式细胞术了,这个需要有分选的仪器,一般分析仪器只能分析比例。
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问
PE抗体无法标记,而FITC抗体的结果却很好,是什么原因?
bamboopiggy
说明是PE抗体有问题了,建议换抗体。
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问
第一次做免疫荧光,镜下观察只有 DAPI 的蓝光,目的荧光几乎没有,这是什么原因?
此用户已注销
出现这种现象很有可能是抗体比例太低,需提高抗体浓度
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问
DAB显色有很多渣渣漂浮物
天一湖医者
两种可能,谨供参考:1.DAB沉渣。建议将DAB过滤后使用。2.载玻片制作工艺有问题:查一下是不是每张片子都这样,如果是其中机张的话,就是载玻片的质量问题。在Paint玻片时,油漆飞溅造成的。建议换质量好一点的。也可以在切片前,在10倍镜下检查一下玻片,把不合格的挑出来。
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问
诱导性多能干细胞(IPSC) 培养问题
Eason老歌迷
这就是诱导的问题,细胞发生死亡了。可以看看这篇文章“iPS细胞诱导中会出现细胞克隆”,讲的很详细。
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问
小鼠精原细胞 53BP1免疫荧光染色。
此用户已注销
这精原细胞染色挺好的,图片也很精美
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问
肠道干细胞olfm4免疫组化染色 一抗用的CST的olfm4,浓度为1:500。 DAB显色时间1分半。
Eason老歌迷
你这个图显色很清晰,很明显,谢谢你分享染色方法。
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