实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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细胞

问为什么ttc染色总是出现一面泛白，一面玫瑰红加白色病灶

Eason老歌迷

是不是没染均匀啊?然后你的TTC溶液最好现配现用，缓冲液可以用配好的。而且染色时必须避光，必须37℃温孵。

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问荧光定量PCR检测LC3-I/II

balalaLy

LC3B相当于LC3-11，一般是检测LC3B的rna水平

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问pDONR221质粒酶切不完全求助

Eason老歌迷

可能是你的酶切时间有些长，因为定性试验，产物的量不甚准确，建议将酶的量做一个梯度，但不是将酶浓度稀释。或者是镁离子浓度可能有些不适合，建议做一下调整。

1 回答403 围观

问各位大佬，请问这个是胰岛细胞吗以及为什么DTZ染色那么浅？

Eason老歌迷

应该是是胰岛细胞。可能是你的细胞数量不够啊，你的dtz是用dmso配的啊，那你可以用dtz溶于无水乙醇试试染色效果怎么样。

3 回答679 围观

问In-fusion反应液可以直接PCR验证吗

Eason老歌迷

可以!你要是p不出来，可以加点Cloning Enhancer，消除了PCR反应液中引物二聚体和dNTP等的影响试一试，我是可以p出来的。

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问有的rct报道的不是均值，而是最小二乘均值，meta时如何合并

Eason老歌迷

有很多种处理方法，比如Cochrane 手册推荐的将数据利用公式合并计算出这三组的一起的均值和标准差，但这只是估计，与真实值肯定有所差别（第一种）。最好的方法是与通讯作者联系看能否请求到数据。这个得看运气有些可能会给，但大部分或者绝大部分都是不会给出的（第二种）。还有一种方法是舍去其中的两个治疗组，比如只保留剂量最大或者剂量最小的组，这不好的地方是最少有三个方面分别是1.存在选择偏倚（可以做个敏感

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问变化率的多个协变量的协方差分析怎么做呀？

Eason老歌迷

1、点击模型——全模型2、选择好对应的变量3、点击选项，进行设置4、最后确定就可以了，第一步和第二步除了在模型进行不同的设置外，其他进行同样的步骤

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问知道中位生存时间与生存时间上下限及人数如何计算95CI

Eason老歌迷

如果知道生存时间和人数，可以利用Greenwood公式进行计算，经proc lifetest过程获取各时间点的生存率及标准误，生存率和标准误对应的变量为Survival和StdErr，计算公式为： Survival **exp(±1.9undefined(StdErr/(Survivaundefinedlog(Survival)))) 其中log(Survival)为以e为底的自然对数函数。

1 回答669 围观

问回归分析求助

Eason老歌迷

初发HfH与初发房颤发生率及%VP的关系用Cox比例风险模型进行评估，以事件的时间作为因变量，并以%VP作为时间

1 回答100 围观

问烟草脆裂病毒TRV VIGS求助

Eason老歌迷

感觉是不是你的注射浓度量有点大?刺激到了叶片

1 回答760 围观

问同源重组的引物退火温度该如何计算

Eason老歌迷

退火温度＝4×（G＋C）＋2×（A＋T）－（5～知8）只是粗算，有时不灵，但比道较简便。或者用primer5（or oligo6）计算，引物配对好后，primer5可以显示Tm，我认为这个值就是退火温度，我的经验再加2 or 3度最好。你的合成引物的单回子上也有个Tm，减去5～8也可。

2 回答3000 围观

问转录因子结合位点具体包括？

Eason老歌迷

不是啊，结合位点有很多，你可以用软件去预测。打开网址：https://jaspar.genereg.net/，在搜索框里输入转录因子NFAT，点击Search。选择一个或多个ID文件，在SCAN序列框中输入FASTA格式文件，得到27条转录因子NFAT与IL17A的结合位点，Strand -没有特殊意义，选择Strand +即可。JASPAR数据库检索出的结合位点来源于已发表的ChIP实验等，主要

3 回答424 围观

问慢病毒感染huh7细胞

Eason老歌迷

病毒不能在光学显微镜下看见。病毒都没有细胞结构，而且比细胞小的多，只能用纳米来表示他们的大小。病毒不能独立生活，必须生活在其他生物的细胞内。

3 回答425 围观

问轴突测量

balalaLy

可以的，奥林巴斯的显微镜有自带的测量标尺，

2 回答751 围观

问求助hp相关胃粘膜肠化模型的建立方法

Eason老歌迷

我自己之前做的时候，参看的这篇文献”实验动物胃粘膜肠化生模型的建立及其应用”

1 回答344 围观

问求助：小鼠MACO手术相关技巧：

Eason老歌迷

我个人觉得，用Zea longa基础上改良的颈内动脉线栓加环扎法制作的大鼠脑缺血模型成功率高，症状明显。大鼠清醒后出现同侧Horner征（梗塞灶同侧瞳孔缩小，眼裂变小，眼球内陷）、向对侧转圈爬行、提尾向对侧旋转、提尾倒立时对侧前肢屈曲者为造模成功。可用于大鼠脑缺血再灌注损伤的科研实验。你要是操作的话，一定要注意线栓头要圆滑，大小合适，建议用玻璃胶头。显微镜下实行手术应注意手法轻重，避免损伤血管造成

2 回答1220 围观

问实验求助

Eason老歌迷

你可以加碱，这样可以增加中链脂肪酸的水溶性。

2 回答115 围观

问HKC不好养

Eason老歌迷

你是不是细胞传代的时机不对，导致细胞老化死亡，或者是你的消化时间太长了。

2 回答270 围观

问药物干预细胞能否说直接就是模仿某种疾病

balalaLy

打个比方说我做衰老，用过氧化氢处理细胞模拟衰老模型，用细胞模型做各种表型、功能、分子调控，在这个基础上再用衰老的动物模型进一步验证。这是不同水平的实验，细胞水平是最简单的，动物实验做得好，文章可以上一个台阶。

3 回答329 围观

问免疫组化，蜡块出现组织收缩凹陷，怎么解决呢？

Eason老歌迷

一个是梯度酒精脱水尽量彻底充分。二是二甲苯透明时间不宜长，1～3h为佳，透明过度会导致组织发硬发脆。三个是浸蜡应选择低熔点的石蜡，浸蜡应充分。

3 回答523 围观

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