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救救孩子吧!WB求助
申东熙老伯
背景脏很大可能是你封闭没封闭好,建议用5%新配的牛奶来封闭。划痕应该是封闭前划到了。
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问
WB 目的蛋白曝不出来
申东熙老伯
目的蛋白没加样的孔有条带可能是你跑电泳的时候样品漏到两边的孔了,电泳的时候就可以注意一下两边没加样的孔有没有溴酚蓝。
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问
求助!!胶体几丁质的制备!
Eason老歌迷
还是没配好,我们实验室是这个配方:2克几丁质(粉末)用预冷的浓盐酸45mL溶解,在磁力搅拌器上搅拌好,此时成黄色。搅拌2小时后,放入冰箱4摄氏度,静置24h。将盐酸混合液加入到300毫升的50%的酒精(预冷好的),搅拌2小时,此时为不透明的乳白色溶液,4000转离心20分钟,看到乳白色沉淀,,用蒸馏水反复洗,这里提一下,文献上都说用大量的蒸馏水冲洗,如果把沉淀收集起来的,用水冲洗,沉淀会被冲走
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问
急,急,急
Eason老歌迷
有些质粒在大肠杆菌中的拷贝本来就很低,可以多收集菌体。这个载体是表达载体,拷贝数低于克隆载体,所以提质粒较少,可以多提取点,洗脱时候少加点洗脱液来提高浓度。质粒拷贝多少跟载体本身有关跟宿主菌关系不大。
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问
贴壁细胞不明原因脱落是支原体污染吗
Eason老歌迷
支原体污染,你肉眼看不见的,如果怀疑是支原体污染,可以使用支原体检测试剂盒检测。我感觉你可能是发生了细菌或者真菌污染。
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问
细胞实验,DAB显出来是整片区域都黄,
Eason老歌迷
首先排除抗体孵育条件。一般来说,着色效果的好坏与抗体的孵育条件是密不可分的。其次,DAB孵育时间是否太长?一般先出现特异性染色,然后随着时间的延长,会出现非特异性背景着色。最后,血清封闭的问题?以前我一般孵育15-30min。
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问
cck-8细胞毒性
Eason老歌迷
一般是先做一个细胞生长周期曲线的,然后你就可以摸索出传代后多久细胞长了多少,然后等细胞长到对数期差不多就可以加药了,不用非要培养24h再加药。我们都是下午种板,第二天上午加药。
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问
细胞释放机制
Eason老歌迷
按道理说,你这个结果是不太可能出现的,怎么可能抑制组反而会更高呢?是不是洗的过程出了问题,洗的不均匀?还是你机器调的有问题。
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问
农杆菌侵染
Eason老歌迷
不属于污染,属于正常生长的农杆菌。
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问
在体LTP波形
Eason老歌迷
这个波形,看着挺经典的,你做了几次,可以多做几次观察图形是否相似。
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问
求助|求问小鼠腹腔注射胰岛素注射剂量,以及单位换算
Eason老歌迷
胰岛素的话,一般1单位的胰岛素为0.0155mg。用生理盐水配就行。
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问
(求助) 细胞消化使用的胰蛋白酶是否可以用于抗原修复
申东熙老伯
最好不要,胰酶消化能力比较强,抗原修复也可以用柠檬酸钠。
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问
4-OHT用量
Eason老歌迷
一般人用4mg,你就按照体积比算鼠的用量。另外我推荐你参看几篇文献,讲的比较全面“4-羟基他莫昔芬对体外培养前列腺平滑肌细胞的作用”、“The Hippo kinases LATS1 and 2 control human breast cell fate via crosstalk withERa”。文章方法里都讲了如何利用4-oht来做体外敲除的。
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问
几组简单的微生物涂片
Dr_劉医生
革氏染色,铜绿和肺炎链球菌都是的G-,马拉色菌G+
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问
P62 mRNA表达和自噬的关系是怎么样的呀?
Eason老歌迷
其实自噬增强,p62的表达也是增多的,只不过这种蛋白降解的快,所以我们检测到的都是降低的,毕竟自噬是很快发生的,他的降解效率可能很高,否则细胞内都是多余的蛋白或功能紊乱的细胞器,就无法维持细胞稳态了。自噬增强,p62的mrna是增加的。
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问
细胞里有很多大块东西是不是污染了
申东熙老伯
可以拍一下照,大块东西不一定是污染,也可能是细胞团。
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问
G2期不明显是什么原因造成的?
dxy_gwrp7ndq
那最好缩短一点处理时间,不要等到细胞状态很不好的时候再测周期
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问
DNA损伤标志物γ-H2AX焦点如何计数
dxy_gwrp7ndq
H2AX荧光焦点计数方法:(1)每个标本由2~3人(放射科医师和/或实验室技术人员)盲法下进行计数,计算平均值和标准差。(2)每个标本(细胞滴片)至少计数40个细胞(细胞数较多时)或40个焦点(细胞数较少时) 。(3)尽量避免选择细胞堆积、融合或微小异物、杂质较多的视野。
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问
免疫组化问题
秋秋欣欣
如果两张组织分开的话可以分别加,如果不能分开加的话最好不要,会影响结果的。
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问
免疫组化的一抗一般可以重复使用几次?
LuoYinli07
4度过夜的话,一般1-3次。不建议回收,这个每张片也用不多少抗体。时间宝贵。
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