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疑似细胞污染,但是细胞库存很少,如何拯救
汤姆卜丽波
把细胞多洗几遍然后转到6孔板里,让它长,然后再挑污染少的或者无污染的消化传代,直到没污染为止,其实很难拯救
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问
提RNA之后,跑胶如图,想问一下是什么原因呢?(maker是一万的)
Dr_劉医生
从图片看用的是Trizol沉淀法跑的电泳图,电泳条带都没分开,marker浓度太高了,一般超过5000ng/UL就很难跑开;可以适当减少上样的量或稀释浓度
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问
GSVA富集的疑问
汤姆卜丽波
患者就是会这样,个体差异比较大
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问
western操作问题
申东熙老伯
洗膜的时候可以放在一个盒子里,孵二抗的时候取决于你的两个蛋白抗体是什么抗什么。
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问
同一种细胞外泌体miRNA芯片测序结果一样吗?
cq2019
首先你要清楚这个外泌体在除对B细胞以外的细胞是否发挥功能作用以及作用的大小?相信类似的报道应该有据可循,要不然盲目做没有创新可言
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问
请问免疫组化显示的时间是多长时间?
bamboopiggy
你做预实验直接摸一下条件,每个人的反应都不一样。一般一抗过夜,二抗室温1-2个小时。
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问
细胞铺板老是长不好怎么办?
申东熙老伯
像24孔板这种的话,需要计数,计数比较精准,也会避免后续步骤的误差。
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问
请问怎样保存小狗(宠物)的基因以便克隆?
bamboopiggy
可以提取小狗的genomic DNA,然后-80度长期保存。最好找专业的机构,自己保存,容易出问题。
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问
WB实验投稿样本的重复性问题?
bamboopiggy
细胞是三次收样,跑三次胶得到三个结果。动物实验是每组至少五个,跑一次就可以。
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问
55-72kd的杂带,还有34kd那里的杂带。真是哭了最近每次做都是这个杂带。原本只有72那条,昨天出现了34那条,今天两条一起
申东熙老伯
抗体浓度是多少?有杂带说明抗体特异性不好,降低浓度试试。
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问
tgf-β 在培养液里的半衰期
whilt-shirt
如果是诱导48h以内,可以不换液,这样就不需要考虑半衰期
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问
qPCR产物长度会影响Ct值吗
灵枢天问
qPCR扩增过程中,扩增产物的荧光信号达到设定的荧光阈值时的所对应的扩增循环数(Cycle Threshold)。C代表Cycle,T代表Threshold。简单讲,Ct值就是qPCR中起始模板扩增达到一定产物量时,所对应的循环数。所谓“一定产物量”后续作进一步解释。和产物长度没关系
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问
求助小鼠T细胞p-STAT3及STAT3流式
Dr_劉医生
可以参考一下这份材料“流式细胞术检测外周血白细胞内的磷酸化STAT3”,数据库都能下载
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问
PBMC细胞污染求助
灵枢天问
大量杆状小点,会运动,培养液略微泛黄这些都是杆菌污染的特征
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问
小鼠检测肝肾功能这些生化指标的话一次大概需要采多少血啊
bamboopiggy
这个要看你怎么测,一般送医院检验科的要200ul的血清,大概500-600ul的全血就可以。
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问
巨噬细胞流式
Dr_劉医生
首先你最好把流式的图片附上一下,圈门的主要是针对那分析哪一群细胞而设的,比如你的就是CD86和206,一般没特殊要求主要都是圈那一群比较集中,数量也较多的那一群,找出这一群不难的
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问
求教氯化钴制作缺氧模型
灵枢天问
曾经看到过一篇文献Western Blot显示CoCl2浓度为200μmol/L时, HIF-1α、Tau5蛋白表达与对照组相比差异有统计学意义。可以测HE染色,cck8或者wb都可以看到缺氧模型构建好了
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问
求助贴,请问人体组织的基因测序结果能否使用动物模型进行验证?
灵枢天问
基因相似度是无法作为评判标准的因为个体差异就很大了何况是种间差异,但是你可以试用一下动物实验
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问
有做植物细胞悬浮的大佬吗?想请教些问题。
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可在培养的不同阶段,吸取一滴细胞县液,放在载玻片上,滴一滴0。1%的酚藏花红溶液(用培养基配制)染色,在显微镜下观察。几活细胞均不着色,而死细胞则很快被染成红色。也可用0。1%荧光双醋酸酯溶液染色,凡活细胞将在紫外光诱发下显示蓝绝色荧光,有经验的操作者,则可根据细胞形态,胞质环流判别细胞的死活。
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问
TM3小鼠睾丸间质细胞培养
灵枢天问
长不起来么。Tm3相对来说长得快但不好养,你拿到细胞的时候怎么处理的直接冻存么,养了几代存的,有可能是当时细胞状态已经不好了
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