实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问二维电泳为什么可以将不同种类的蛋白质进行高分辨率的分离？

小小翻车鱼

在等电聚焦阶段，蛋白质首先按照它们的等电点（pI）进行分离。等电点是指蛋白质电荷为零的状态。不同种类的蛋白质具有不同的pI值，因此可以通过调整pH梯度使得蛋白质在电场中的迁移位置达到各自的等电点，进而实现分离。在IEF阶段之后，蛋白质进一步按照分子质量进行分离。在这一阶段，蛋白质与SDS（十二烷基硫酸钠）结合，使得蛋白质带上负电荷，并按照分子质量的大小进行分离。SDS-PAGE利用聚丙烯酰胺凝胶进

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问做SNP的统计分析流程是什么？

小小翻车鱼

以下是进行SNP统计分析的一般流程：1. 数据准备：首先需要收集SNP芯片或者测序数据，并整理为可读取的格式。同时，需要收集表型数据，如病例与对照的临床信息等。2. 数据质控：在分析之前需要进行数据质控，包括SNP和样本质量控制。对于SNP数据，可以检查基因型频率是否符合Hardy-Weinberg平衡，以及缺失数据和错误基因型的比例是否过高等。对于样本数据，可以检查样本是否存在批次效应和离群值等

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问基因组 DNA 进行 PCR 之后电泳结果条带宽

周末也要努力呀

跑胶的时候没有压好，跑慢一点。

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问小鼠化疗清髓后，为了预防感染，请问用的抗生素是人用的还是兽药

周末也要努力呀

老鼠适应兽用抗生素，计量也得按照个体进行注射

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问中药含药血清MTT后筛选合适的干预细胞实验的浓度依据是什么？是选择细胞相对存活率最高的吗？

高山云初

对，药物浓度的设定是细胞相对存活率！一定要多看文献，参考别人的结果再定个比较大的范围先初筛。根据自己初筛的结果缩小浓度和时间范围再细筛。

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问ROS活性氧检测 DCFH-DA检测

土井挞克树

考虑空白组可能存在污染，比如荧光剂污染就会出现空白组荧光强这个问题

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问大鼠癫痫持续状态模型建模

小小翻车鱼

1. 癫痫发作的判定标准：在大鼠中，癫痫发作的判定标准通常包括以下几种表现： a. 出现强直、阵挛等明显的抽搐现象。 b. 动物出现肌肉僵硬、呼吸急促、心率加快等生理反应。 c. 脑电图（EEG）记录到明显的癫痫样放电。2. 给予地西泮的时间：在大鼠出现癫痫发作的迹象后，应尽快（如几秒钟内）给予地西泮，以终止发作。地西泮是一种GABA受体激动剂，可以增强GABA的抑制作用，从而降低神经

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问病毒分离时没有病变，PCR也没有条带

土井挞克树

pcr没有条带说明转导失败，可能是质粒的问题，也可能是引物的问题

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问请问如何能从二级质谱为蛋白定性？

huarenqiang5

利用液相色谱串联质谱（LC-MS-MS）的方式检测。先通过液相进行有效分离，将各蛋白质组分分开，再通过二级质谱进行片段化检测定性，真正的将蛋白定性做到速度快且数据精准。

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问质谱数据结果的最大利用

huarenqiang5

通过对质谱数据的后处理，将目标化合物的质谱图从原始谱图中提取出来，根据新建的“纯净”的质谱图对目标化合物进行确证将更有实际应用的价值。通常提取“纯净”的质谱图的方法是扣除“本底”的方法，主要过程为从目标化合物的质谱图中减去其周围本底的质谱图。然而其效果只能去除那些相对丰度较低的本底干扰离子(例如柱流失物所产生的碎片离子)。对于丰度较高的共流出物及复杂基质干扰物的离子，扣“

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问WB实验结果不同的原因是什么？

sswei

可能是在显影液环节，简单来说就是膜没有淋干净，上面残留参差不齐的 T/TBS，T/TBS 能稀释显影液，目的条带本来表达量就少，某一个点残留的 T/TBS 稍微多一点就可能导致显影效果下降

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问常规pcr扩增跑不出来什么原因？

土井挞克树

考虑是模版的问题，建议更换模版后再做

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问打修饰组学，如果打到的片段比较少是不是就不可信呢，如何提高样品质量，都有什么影响因素

huarenqiang5

从以下几点来提高样品质量:1.样本收集方案：研究方案中应明确样本分组，每组样本数量，样本供体的纳排标准，每个样本的采集方法、体积/重量，现场前处理要求，储存条件，样本信息收集标准等内容，避免产生错误采集、混肴、交叉错配等问题。2.耗材、储存、运输条件准备:离心管/离心机、现场前处理试剂、移液枪、封口膜、样本标签、干冰、保温厚泡沫箱、-20℃/-80℃冰箱等均应按标准准备到位，最好是知名品牌，并经过

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问【求助】请问高脂联合腹腔注射维生素D3建立大鼠动脉粥样硬化模型有成功的吗？用了多久

Luckybabygirl

高脂饮食至少21天，其他的你得参考文献，我们是小鼠喂养3周，第四周进行相应的干预，和你的干预条件不一样哈，另外，饲料配比你得摸索，我们按文献里的设计，小鼠吃的不好，因为受温度，批次以及各种条件的影响，然后我们加了一些坚果类的东西进去，就是香了一点，小鼠吃的很开心，也是文献支撑的嗷。所以你在设计饲料的时候第一次少买一点，以免浪费

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问求教制备不脱钙硬组织磨片技术问题

huarenqiang5

组织进行脱水时要注意，一方面要由低浓度酒精开始脱水，比如从40%或50%的浓度开始，且在脱水时尽量不使用无水乙醇等强脱水剂，因这些脱水剂使用后会增加骨组织的硬度，在经二甲苯等透明剂透明后，使骨组织的硬度更大，不利于制片。另一方面，建议对于以皮质骨为主的骨组织透明时，使用收缩性稍弱的脱水剂，如正丁醇、氯仿等可以兼顾脱水、透明双重作用的透明剂代替二甲苯，效果会更好。

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问小鼠E11.5天胚胎太小没有成形怎么办

江朵朵_

你是用胚胎来做什么实验呢？如果是原代细胞的话好像都是取14天左右的胚胎，这时候胚胎已经成型了

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问RNA scope染不出目标探针，不知道怎么回事

huarenqiang5

由于样本本身制备过程中未按照标准流程，固定不充分，导致RNA大幅度降解，故无法检测到靶探针信号。

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问如何提取细胞上清液？

dxy_9njnv24q

吸取细胞上清液，然后离心沉淀细胞碎片，或者是用过滤器过滤上清液即可

6 回答3756 围观

问细胞实验我要加一种通路抑制剂，如何确定通路抑制剂的浓度和作用时间？是IC50吗？（查文献只有个参考范围，如何精准确定浓度)

高山云初

抑制剂的使用量受多种因素影响，包括抑制对象的可接触性，细胞通透性，孵育时间，细胞种类等等。我们建议通过检索文献确定使用抑制剂的起始浓度。如果有报道的K i 值或IC 50值，可以采用其5-10倍的量开始尝试以达到抑制酶活性的最佳效果。如果抑制剂的K i 值或IC 50值未知，则需要在更广泛的范围尝试抑制剂的使用浓度，并采用Michaelis-Menten动力学计算K i 值。采用高浓度抑制剂而没有

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问HUVECs人脐静脉内皮细胞好养活吗？和肿瘤细胞A549比起来呢？容易污染和传代吗？有哪些什么培养过程中的好建议和注意事项⚠️

huarenqiang5

人脐静脉内皮细胞没有肿瘤细胞A549好养。容易被污染，培养时应严格无菌操作。

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