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问
蛋白质点杂交求助!
土井挞克树
我解答一下你关于NC膜的疑问:选择硝纤NC膜时要注意的是选择合适的孔径,通常20KD以上的大分子蛋白用0.45um孔径的膜,小于20KD的话建议选择0.2um的,如果小于7KD的话选择0.1um的膜。另外还要注意选择纯的NC膜。混有含醋酸纤维(CM)的NC膜结合力会有所降低。 另外,由于NC膜上结合的蛋白会因为一些去污剂而被代替,因此在封闭时使用较温和的Tween20,而且浓度不要
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问
金葡PFGE一直跑不出来
土井挞克树
条带降解可能是(造成的原因是因为Tris缓冲液当中含义盐酸的成分被氧化,使得溶液从碱性变为酸性,二某些菌体本身在酸性的环境中容易被降解,造成我们在pfge条带图当中看不到相应的酶切位点。如要改善这个情况,需要加入适量的硫脲到0.5X TBE中,然后在进行电泳。因为硫脲是一种还原剂,可以中和氧化物质,从而改善条带分型或一片模糊的现象
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问
ELispot 问题分析
土井挞克树
大概率是非特异性结合,一般来说特异性结合的斑点大,非特异性结合斑点小。
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问
CHIP超声!细胞一半超过了,一半完全没超开
土井挞克树
细胞密度过高,超声就可能超不过气,建议调整细胞密度。
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问
msc细胞这样拉丝?爆炸?是什么状况啊
土井挞克树
可能是你接种密度太低。无血清培养基必须高密度接种,接种密度过低,会导致细胞长不起来,呈现拉丝状
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问
琼脂糖核酸胶浓度越低分离效果越好吗
此用户已注销
不是的,一般要根据要电泳分离的核酸的分子量大小:分子量大的核酸电泳时使用浓度较小的凝胶,分子量小的核酸电泳时使用浓度较大的凝胶.核酸在浓度越大的凝胶中电泳速度越小.如果胶浓度偏高,可能跑不动,如果胶浓度偏低,可能跑得太快,分不开.
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问
质粒测序
Dr_劉医生
28a的分子量太小了,pcr扩增结果跑不完整
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问
求助,rna跑胶条带这个样是为什么
balalaLy
提取的RNA是没有问题,提完到跑胶的过程可能出现了降解。
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问
triton X-100什么浓度能破碎细胞膜,处理多久才可以呢,谢谢
balalaLy
细胞和切片用0.1-1%,孵育15-30min,厚一点的组织块可以用到3%。
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问
小鼠血清效价测定完如何做趋势图
Dr_劉医生
你把各时间点的血清结果代入方程啊,用软件可以出图,需要自己修改一下
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问
实验过程中荧光强度弱怎么处理?
土井挞克树
1 荧光染料和显微镜的荧光块可能不是很配合 2 汞灯的中心没有调节好,或者汞灯的寿命到了 3 样本的制作是否可以更好, 4 是否用用了合适的物镜
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问
要验证某个细胞上有无该蛋白的存在,需要做免疫组化和westernblot试验吗?做这两个试验时的一抗和二抗可以共用吗
土井挞克树
需要做两个实验,抗体可以共用。
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问
怎么使用Quantity One进行wb条带的灰度分析,特别是怎么去除本底
土井挞克树
Quantity One可以直接进行灰度值的计算,去除本底在开始时可以简化。
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问
细胞WB抗体怎么选
Dr_劉医生
一抗选羊抗,兔抗或者是人源性抗体都可以,得结合文献来确定最后用哪种特异性好,另外单克隆优先
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问
质粒含量的问题
Dr_劉医生
可以用上清液测质粒DNA的含量,没啥问题
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问
小鼠GAPDH内参可以扩大鼠吗
Dr_劉医生
可以用,鼠源的管家基因都是同源的,GAPDH都可以用
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问
流式细胞术实验中,荧光弱常见原因是什么?怎么解决?
明査日月
前带现象 抗体稀释过度 细胞数量过多 抗原本身表达弱
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问
ELISA实验检测类型
juyue2010
都可以做的,分泌型的检测上清就行,膜蛋白裂解提总蛋白后检测
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问
Elisa
Dr_劉医生
没有,抗原和孔板结果本质就是蛋白质和板基质的疏水结合力,是非特异性的,根据蛋白质大小不一样可能有变化,但你的蛋白抗原也不可能变,唯一的话试一试微孔板,板基质状态不一样可能会增加结合力
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问
elisa怎么做
juyue2010
先做wb,先根据说明书进行稀释,效果不好的话,进行优化
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