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问
.蛋白质液相色谱法的步骤是什么?
土井挞克树
液相色谱仪的测试步骤总共分为三个步骤: 第1步:测试产品或者样品做分解和分类: 根据标准,将所测试的样品或者产品拆解/分解到机械方法无法拆分的均值样品。并根据均值样品的材质进行分解为:塑料基体,五金金属基体,铝镁基体和焊锡基体。 第2步:分类测试样品的中: 根据分类后的样品,对塑料基体的样品分别用XRF做Pb、Cd、Hg、Cr,Br元素的检测和用ROHS2.0测试仪做邻苯4项的检测,综合判
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问
western转膜以后marker很模糊有的条带还转不上是什么原因
NatureBios
在凝胶中marker也模糊么,大概率是上样少了,我们可以增加marker的上样量,浓缩胶到分离胶距离大概1cm,让蛋白压缩在一条线上,转好的膜可以做个丽春红染色,看看转印的效果,转不上的通常是大分子量的,我们可以在转移缓冲液中加入sds
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问
293T这个细胞形态正常吗
申东熙老伯
正常,细胞密度问题,第一张是传代的时候没把细胞摇匀。
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问
测未知物(单体化合物)的激发和发射波长
土井挞克树
因为你是未知物,那么你物质的性质是不清楚的,所以要做溶解曲线,对未知物有一定分析。
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问
WB曝光后背景噪点太高,求大家指点
土井挞克树
背景噪点高是由于 ① 膜封闭时间不够,室温下通常摇床孵育膜 1h,出现这种情况可以更换合适的封闭液或者适当延长封闭的时间; ② 抗原抗体免疫过程中一抗稀释度太高,可以多设置几组一抗浓度,摸索最适宜的抗体稀释度; ③ 在整个实验过程中膜发生干燥或手套反复接触过也会发生背景值高的情况,因此实验过程中要注意保持膜的湿润,使用镊子夹取膜。
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问
LC3B的电泳条件是什么才能跑出漂亮的条带呢?
土井挞克树
LC3分子量比较小,只有16KD,在电泳的时候需要使用12%-15%的胶,避免跑过。转膜的时候需要使用0.22um的膜,缩短转膜的时间,40min即可。切莫使用0.45um的膜,否则量相对少的LC3I更不容易显出来。
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问
油红O染色不理想,甘油明胶封片后可以重新再染色吗
Dr_劉医生
可以,但重新上蜡,脱水,脱酒精会干扰你再次制片的结果,建议选好染色方法,谨慎封片
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问
免疫荧光,一次能做到几色?会相互干扰吗?
土井挞克树
可同时做到五个通道,他们不是相互干扰是发射光谱会重叠
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问
有研究血友病B的大神吗?凝血因子IX(FIX)怎么检测活性?不是FIXa。具体方法
Dr_劉医生
凝血因子Ⅸ(Ⅸ︰C)的促凝活性检测一般用QuickⅠ一期法,正常参考值:凝血因子Ⅸ︰C:67. 6%~128. 5%。还可以用免疫火箭电泳法测定凝血因子Ⅸ︰Ag:68. 7%~127. 7%。
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问
请问有没有3*到5*的DNA聚合酶
土井挞克树
DNA聚合酶III这种酶既有5’→3’方向聚合酶活性,也有3’→5’核酸外切酶活性。该酶的活性较强,为DNA聚合酶Ⅰ的15倍,DNA聚合酶Ⅱ的300倍。他能在引物的3’-OH上以每分钟约5万个核苷酸的速度延长新的DNA链,是大肠杆菌DNA复制中链延长反应的主导聚合酶。
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问
培养基中的酵母提取物灭菌问题
申东熙老伯
一次不要配太多,用孔径小的滤膜在超净台过滤除菌。
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问
小鼠皮下肿瘤拍照问题
juyue2010
有标尺,一组一组拍照,可以对比
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问
血清和粪便短链脂肪酸检测
balalaLy
Construction of a sustainable 3-hydroxybutyrate-producing probiotic Escherichia coli for treatment of colitis 最近在看的一篇文献里有这方面的,用的LC-MS方法检测
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问
产生孢子数量很少的放线菌如何配成一定浓度的孢子悬液呢
明査日月
适当提高培养液浓度增加营养 延长培养时间
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问
不同孕周早产儿甲状腺激素正常值?
丁香52
孕妇的促甲状腺激素正常值一般根据时期不同指数不同,通常分为妊娠早期、妊娠中期和妊娠后期。1、妊娠早期:在12周内,促甲状腺激素值为0.1-2.5miu/l之间是正常。2、妊娠中期:12-28周,促甲状腺激素正常值为0.2-3.0miu/l。3、妊娠后期:大约28周甲状腺激素正常值是0.3-3.0mIU/L。
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问
抗体1、2ul,应该用什么方法纯化
Eason老歌迷
可以试一试Protein A和protein G纯化法。基本原理就是protein A和proteiin G 可以和抗体IgG分子的Fc段特异性结合。Protein A和protein G 作为配基可以被偶联到琼脂糖凝胶上,当抗血清从中流过时,特异性的IgG就与配基结合,其他杂蛋白则穿流而过。因两种蛋白纯化抗体时对不同宿主的抗体的结合能力不同,我们需要具体情况具体对待,分别选择protein A
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问
蛋白沉淀
明査日月
加百分之十甘油对后续实验不会有影响
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问
qPCR的图方差很大怎么办?
juyue2010
若是技术重复导致的话,是操作问题,先做好mix,再分别加到每个孔,操作时间别太长,加好样直接上机。若是生物重复导致的话,那就是说样品处理平行度差
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问
GEO数据集里面病例数较少
juyue2010
会有疑问,病例数少,统计结果可信度大为下降
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问
灵敏度与特异度的提问
Dr_劉医生
可以用,类似于构建预测模型和已知的模型进行对比,但有个问题,你的筛查方法1检出阳性(就是灵敏度)也得参考金标准来,确认假阳性率有多少;不然单独筛查2用金标准存在误差
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