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实验问答

31,877,227 科研人在看

问血吸附实验的具体操作步骤？

土井挞克树

.2 方法1.2.1待检样品制备将待检细胞经无抗生素培养基传1代，取三天未换液的且已长成单层的细胞，反复冻融3次，1000rpm离心15min除去细胞碎片，收集上清液，过滤除菌后即为待检样品。悬浮培养型细胞直接冻融后离心，同法制备待检品。1.2.2 接种培养1) 致细胞病变试验二倍体细胞、Vero细胞以及与待检细胞同种属同组织类型的细胞，每组细胞6瓶，每瓶20ml，每瓶接种待检样品3ml。于5%C

1 回答6133 围观

问求小鼠T淋巴细胞绝对计数方法

土井挞克树

可以用玫瑰花环试验，又称为花结试验。是测定小鼠淋巴细胞数量和功能的一种方法

1 回答585 围观

问为什么这个蛋白有两个条带

Eason老歌迷

很可能是该蛋白出现了同源二聚体，故都可以被抗体识别出来或者该蛋白有部分降解，但是未降解部分依然可以和抗体结合另外抗体特异性不高，也会出现非特异性的结合，造成出现两条或者多条带。

3 回答2488 围观

问同一条带曝光结果前后不一致

Eason老歌迷

同一张膜，本人可以在成像的时候，做出完全不同的图片结果。显色液的滴加，量，以及曝光时间，条带颜色（要求灰色而不是黑色）。所以最好有图片说明问题。

3 回答459 围观

问想比较两种营养干预对小鼠肠粘膜Muc2表达的影响，用切片好呢？还是用提mRNA？

土井挞克树

还是用mrna比较好，结果准确可信

3 回答590 围观

问做空肠的免疫荧光，测杯状细胞和潘氏细胞数量，可以在同一切片上同时染吗？

Eason老歌迷

可以的，是可以在同一切片上同时染色的。

6 回答698 围观

问纯化抗体时，磁珠总是拉不下来蛋白，怎么办

Eason老歌迷

可能是你的洗脱调节太温和。提高洗脱液咪唑浓度至500mM，还不能洗脱时，可以尝试降低洗脱液pH至4.0，但低pH会也导致金属离子脱落；也可能是蛋白吸附在磁珠上无法洗脱。对于非特异性疏水吸附的蛋白，可以增加NaCl浓度至1M，或添加0.1%~2%的Triton X-100。对于聚集沉淀在磁珠上的，可以在洗脱缓冲液中加入6M盐酸胍进行变性洗脱。

4 回答1085 围观

问流式分析调整染色补偿需要注意什么？

此用户已注销

需要注意的是：单色阳性样本需要有足够的阳性细胞使用和样本相同的颜色，确保强度不低于样本如果用微珠代替细胞，要注意某些细胞的染色可能强于微珠上机后，先调整电压，使目标阳性峰在自己的通道上高于其他的通道记录数据，就算补偿

3 回答1266 围观

问苏木素用久了颜色变黄

秋秋欣欣

可以人工氧化让苏木素变回红色，仍可以继续使用

4 回答1227 围观

问文献里已知检测限0.5amol，如何计算转化成拷贝数/ml呢？

Eason老歌迷

计算公式为6.02 x 10(23)) x (ng/ul x 10(-9) ) / (DNA length x 660) = copies/ul。如果DNA/RNA的量是ng/ul，那么拷贝数（copies/ul）=[（ng数×10的-9次方）×（6.02×10的23次方）]÷（碱基数×345）例：3000 碱基质粒，浓度100 ng/ul ，MW= 3000 bp x 660 dalton/bp

3 回答3530 围观

问请教一下这种图怎么看呀

土井挞克树

这个图里面横轴代表的是核糖核酸，纵轴是表达产物，一是空白对照，有加号是有统计意义，后边是条件不同时的产物表达

2 回答439 围观

问差异基因后面先做蛋白分子互作还是富集分析

balalaLy

1就是简单的生信分析，文章不会很高分，2的话工作量会很大

3 回答850 围观

问细胞周期

土井挞克树

一般都是流式看细胞周期G0/G1期：流式检测结果图的第一个峰；G1期是DNA含量最少的时期，DNA复制还没有开始；G0期是细胞静止期，不复制DNA，无法与G1期分开，所以报告为G0/G1期；　　S期：在流式结果图中显示为第二个不高但很宽的峰；此时期细胞开始复制到完成复制，是一个一倍DNA到二倍DNA的过程；　　G2/M期：流式检测结果图的第三个峰。G2期是DNA复制完成至分裂的一段时间，此时细胞内

2 回答1267 围观

问胰岛素抵抗导致内皮损伤的细胞模型

paj12345

可以的，葡萄糖和果糖都属于常见的单糖，都能被细胞吸收利用，狭义的胰岛素抵抗是指葡萄糖利用率下降，类比果糖的利用率也会下降。

3 回答531 围观

问求助：人外周血单个核细胞分离、冻存的问题。

huarenqiang5

细胞分离外周血用电动助吸器按照每管不多于35ml。平均分至50ml离心管中， 931×g，离心8min，吸取上层血浆至50ml 离心管中，取1 5 m l于E P管中。标记。 -80℃保存。用NA稀释血细胞，使得血细胞:NA为1、 1，混匀后均匀缓慢地加至相应的A液上层。形成完整的界面。 596×g。离心20min。可见明显分层。吸弃第1层上清。小心轻柔地将第2层的白色细胞层分别吸至

4 回答864 围观

问新手小白，求助流式实验中的问题？

lyang556

APC英文全名：allophycocyanin；中文名：别藻青蛋白；最大吸收峰：650nm，最大发射荧光峰：660nm，适用于双激光流式仪，可被600-640nm波长的激光激发。

4 回答671 围观

问FL1， FL2， FL3 的区别是什么? 是指在不同位置测得的荧光?还是不同波长的荧光?这3个参数到底测的是什么

elabscience

FL1， FL2， FL3是流式的三个通道，对应3中不同波长的滤光片，用以接受不同的荧光信号，具体每个通道检测的波长范围需根据仪器配置来确定。

3 回答11243 围观

问求助流式细胞术分析标本保存的问题？

elabscience

需先制成单细胞悬液，然后使用70%乙醇固定即可，可存放于4℃/-20℃，但是还是建议尽快检测，样本放置时间过长可能会导致检测时CV值过高。

4 回答2857 围观

问做实验想用流式细胞术分析细胞周期及凋亡率，都需要用到RNAs酶，可以一起检测吗？

elabscience

如果仅采用PI单染法，通过观察sub G1峰来判断凋亡的话是可以同时检测的；如果是采用Annexin V法来检测凋亡，则不能和周期同时检测，因为周期需要固定细胞，而Annexin V法需要使用活细胞。

4 回答988 围观

问请问流式检测结果图框选阳性区域时，如果没有明显的分区，都认为强度＞10^1为阳性吗？

土井挞克树

是的，所以在流式之前都建议选好分区

3 回答557 围观

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