实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问请问多重PCR的体系如何优化？

huarenqiang5

在选择多重PCR扩增条件(尤其是退火温度和时间)时应尽量选择有利于较大片段扩增的条件 (1)退火时间和温度在循环参数中,影响多重PCR扩增效率的主要因素是复性温度和延伸时间。复性温度的设置策略与单个PCR相似。先计算引物的熔解温度(Tm),在此基础上推算复性温度T。(T=T。-5)。然后用“逐步引人法”确定多重PCR的最佳T,即每增加一对引物,就根据扩增的结果调整复性温度,直至每一种被扩增的基因片

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问请问一下，复苏的细胞量太多了，第二天就需要传代，会影响细胞状态吗？

loveliufudan

复苏的细胞数量过多，如果不及时传代，会导致细胞密度过高、营养物质不足、代谢产物积累等，从而影响细胞状态和生长状况。因此，第二天需要传代的情况下，最好不要等到细胞密度过高才进行传代，应尽早进行。细胞密度过高会导致细胞之间竞争养分和空间资源，细胞生长受到限制，细胞进入停滞期或凋亡状态。另外，过高的细胞密度还会增加细胞间的接触和摩擦，增加细胞的损伤和死亡风险。细胞密度过高还会导致代谢产物的积累，如乳酸和

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问血小板活化是可逆的吗，可以使用台式液使其恢复静息状态？

土井挞克树

理论上是不可逆的，活化后不能恢复静息状态。

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问对于生物医用高分子材料，从哪些方面评估其对细胞的毒性和生物相容性的影响？

huarenqiang5

从血液反应、免疫反应及材料反应进行评估。

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问尊敬的老师，师兄师姐们好，请问有抗性基因，转染成功的细胞无论在浓度多大的抗生素筛选下都能存活吗？

huarenqiang5

有抗性基因，转染成功的细胞只能在合适浓度的抗生素筛选下才能存活。

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问研究HBV的复制应该用哪种肝细胞合适

sswei

体外研究一般用克隆的病毒基因组转染肝肿瘤来源的细胞系后可实现HBV复制和病毒颗粒组装,或采用人原代肝细胞(PHH)来源的。

3 回答321 围观

问细胞培养过程中，PH突然变化快的原因有哪些？

sswei

培养过程中，生长期细胞代谢旺盛，产生CO2与乳酸，导致pH的下降，而后随着稳定期、衰亡期的到来，CO2释放多于生成，乳酸有可能有所消耗，培养液pH值逐渐上升。

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问单个B细胞制备单克隆抗体

loveliufudan

进行流式细胞分选时，选择特定的荧光标记可以区分不同类型的免疫球蛋白（Ig），例如IgM和IgG。在某些实验中，需要对不同类型的B细胞进行分离和分析，以了解它们在免疫应答中的不同作用。对于只需要分离IgG的B细胞的实验，原因可能是因为IgG是较为常见的免疫球蛋白类型，也是典型的记忆性免疫应答的产物。在初次感染后，B细胞会分泌IgM抗体，然后在IgM介导的清除病原体过程中，一些B细胞会转化为IgG产生

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问在过表达实验中不想让它表达的量太高，如何降低过表达基因的量

huarenqiang5

通过蛋白泛素化修饰或者用siRNA(或shRN A)干涉处理。DNA和染色体水平:基因丢失、基因修饰、基因重排、基因扩增、染色体结构变化。转录水平调控:转录起始、延伸、终止均有影响。原核生物Q借助于操纵子，真核生物Q 通过顺式作用元件Q和反式作用因子相互作用进行调控。转录后水平调控:真核生物原初转录产物经过加工成为成熟的mRNA，包括加帽、加尾、田基化修饰等。

3 回答708 围观

问质粒抽提的时候总是拿不到想要的目的片段，设计引物的时候可以设计的长一点吗？

huarenqiang5

引物的长度一般为15-30 bp，常用的是18-27 bp。不应过长。

3 回答378 围观

问楼主可以分享下plos one 手稿的投稿格式吗第一条到底啥意思呀啥是latexdiff

土井挞克树

这个是更改后的差异，按照步骤修改就行了

3 回答412 围观

问中华创伤杂志是不是最近遇到什么问题了

土井挞克树

中华的杂志一般比较严格，成功含金量也高

4 回答294 围观

问分子标记实验Pcr结果太糊

sswei

主要存在引物质量差，PCR反应扩增增强等所致。据此，需要更换引物，优化pCR反应流程。

4 回答758 围观

问噬菌体展示能在普通生物实验室进行吗？

sswei

需要在无菌的条件下进行实验操作，否则容易失败。

4 回答1385 围观

问coreldraw能画这种图吗

土井挞克树

可以的，这个coreldraw和ps都可以

3 回答264 围观

问细菌培养，脆弱拟杆菌

土井挞克树

TSB中可以适量添加乳糖，效果好一些

3 回答1019 围观

问crispr慢病毒文库感染293T细胞时，细胞接种密度多大？

sswei

crⅰspr慢病毒文库感染293T细胞时，细胞接种密度大概50%~70%为好。

4 回答1103 围观

问用大鼠腹腔静脉血进行流式检测可以吗

土井挞克树

可以的，建议处理掉混杂细胞，这样筛选准确率高

3 回答293 围观

问新手请教一个问题，为什么这里会出现负值？

sswei

可能存在数据转换、计算过程中的错误，应该重新开始。

3 回答370 围观

问蛋白表达是包涵体怎么办

dxy_kdzvaizq

1. 降低诱导温度2. 降低诱导剂浓度

5 回答1054 围观

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