实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问求助！有没有对胶原蛋白肽生产了解的大神？

loveliufudan

这是因为胶原蛋白酶解喷粉的主要成分为水解胶原蛋白，它的分子结构较大。在中性或碱性环境下，水解胶原蛋白分子的电荷呈负电荷，分散在水中。但是在酸性环境下，水解胶原蛋白分子的电荷被中和，导致分子间吸引力增强，从而使得胶原蛋白酶解喷粉变得混浊。

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问RNA核质分离法

loveliufudan

RNA核质分离法是将细胞或组织裂解后，通过离心、洗涤等步骤将细胞核和胞质分离，从而得到分离的核糖核酸（RNA）。在这个实验中，将U6 RNA作为核内参照物，通过比较其在核和质中的表达量来评估核酸提取和分离的效果。关于实验结果出现核质RNA表达差不多各一半的情况，这可能是由于以下原因之一：核酸提取不完整：在分离核和质的过程中，有可能存在某些核酸留在了另一个部分中，导致分离效果不完全。可以尝试重新优化

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问细胞共培养

huarenqiang5

你这个情况可以用小室进行培养。

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问SD大鼠皮肤组织石蜡切片

huarenqiang5

考虑原因主要是:1.可能脱水处理不当，重新脱水处理。2.有透明剂残留，需增加浸蜡时间，重新包埋。3.由于脱水剂和透明剂的影响，使组织变硬发脆，需调整脱水程序。4.可能组织太大，建议分开包埋。建议切片之前放－20度冰箱把组织块放20min会比较好切。

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问培养基成分纯度要求

huarenqiang5

葡聚糖的纯度建议为70%为宜。

3 回答606 围观

问请问三代测序下机数据量偏低会有什么问题？怎么解决呢？

huarenqiang5

原始下机数据都以二进制文件为主，第三代基因测序技术目前的错误率在15%-40%，极大地高于二代测序技术NGS的错误率（低于1%）。不过好在三代的错误是完全随机发生的，可以靠覆盖度来纠错（但这要增加测序成本）。你这个主要考虑结果的错误率高。想要把数据转换成正常人能看懂的格式，这时身为文本文件的Fastq就应运而生了，Fastq文件会被用于质控及比对等后续分析。

3 回答1095 围观

问骨髓间充质干细胞培养

huarenqiang5

无需程序冻存，细胞可直接置于- 80°C冰箱完成冻存过程；无血清无蛋白配方，成分明确，不影响细胞的生长和分化潜能及其它高级应用；冻存步骤[1]1. 选择处于对数生长期的细胞，按照常用的方法收集细胞于离心管中，按照培养细胞密度和所用细胞冻存管的尺寸计算所需冻存细胞数（参考数量：5×105 至 5×106cells/mL）。2. 取相当于所需细胞数的细胞悬浮液量，置于离心管中，离心收集培养细胞（考离心

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问细胞培养的问题求助？

土井挞克树

大概率是黑胶虫，如果大面积污染就需要重做

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问各位大神，我做的肠道TLR4-NFkB,用WB测肠道总p65下降，是否可以说明通路被抑制了，还是必须测磷酸化NFkB

loveliufudan

肠道TLR4-NFkB通路的激活可以通过NFkB信号转导通路进行，而p65是NFkB家族的一个成员，因此在一定程度上可以反映该通路的活性。p65在未被磷酸化时会停留在细胞质中，而当受到特定信号激活时会被磷酸化而迁移进入细胞核并激活下游基因的转录。因此，p65的下降可以暗示该通路被抑制了，但并不能说明抑制是由于磷酸化的改变，还是由于其他机制的调控，例如通过核转运的改变。如果你想更全面地了解该通路的活

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问如何做mRNA变性胶

土井挞克树

变性聚丙烯酰胺凝胶，是分子生物学常用技术之一，凝胶的灌制比水平电泳槽凝胶灌制困难，漏胶和产生气泡常在所难免，需经过反复实践才能掌握其灌制技巧。

4 回答410 围观

问在current vascular pharmacology上投了一篇文章最终的内容审核要多久

土井挞克树

一般一个月左右，过了一个月可以询问编辑

4 回答3007 围观

问pcr两条引物同时在一条链上会怎样？（两个都是正向引物）

huarenqiang5

这样一般是引物序列设计不合理，然而就可以导致位于5'端的引物合成到3'端的引物后无法继续进行，但是3'端的引物可以一直复制到3'末端。

4 回答3789 围观

问想说明某因子促进病毒复制从而致瘤有关研究，转染和接毒顺序是啥样？

土井挞克树

在病毒感染的前提下做过转染成功率高

4 回答321 围观

问lip3000脂质体转染问题？

土井挞克树

建议先加到无血清培养基再转染，成功率高

4 回答1475 围观

问为什么要热灭活血清？

土井挞克树

热灭活目的是为了去除血清中补体等对热敏感的物质

5 回答1221 围观

问细胞内的蛋白如果暂时没有时间提取，可以先把细胞离心取沉淀然后冻起来，等有时间再提吗？

loveliufudan

是的，将细胞离心取沉淀并在冷冻保存之后，可以在以后的时间点进行蛋白质提取。事实上，这是一种常用的技术，在许多实验室中被广泛使用。当细胞被冻结时，其代谢活动会停止，因此细胞内的蛋白质也会停止活动并保持在原位。然而，应该注意到，蛋白质可能会发生不可逆的变性和降解。因此，在冻结细胞前，最好根据需要的蛋白质提取方法对样品进行预处理，并使用适当的缓冲液和保护剂以保护蛋白质。在提取蛋白质之前，需要将冷冻的细胞

4 回答4371 围观

问MDBK细胞需要用什么培养基培养，血清比例是多少？是贴壁细胞吗，需要胰酶消化吗？

土井挞克树

细胞特性　　1）来源：牛肾正常细胞　　2）形态：上皮细胞样，贴壁生长　　3）含量：>1x106细胞数　　4）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装　　5)用途：仅供科研使用。培养基及培养冻存条件准备：　　准备1640培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。　　2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。　　3）冻存液：90%血清，10%DMS

4 回答1072 围观

问细胞在荧光显微镜下看不到是怎么回事？

土井挞克树

设置的波长可能不对，重新设置波长或者调节荧光补偿

3 回答1429 围观

问载药颗粒释放速率测定

土井挞克树

用你的平均释放速度除时间就得到释放速率

3 回答4558 围观

问急问！！三组独立样本但有两个重复，是用两两t检验还是单因素方差分析？

loveliufudan

对于您提到的这种情况，建议使用单因素方差分析来分析这三组数据，而不是多次进行两两 t 检验。单因素方差分析可以比较三组或以上的样本均值是否显著不同，同时还可以检验不同组别之间的交互作用，比如模型组与治疗组的交互作用。在您的情况下，对照组与模型组之间的比较可以作为交互作用的一部分考虑，因为模型组与治疗组的差异可能取决于对照组的胆固醇水平。非参数检验也可以用于这种情况， Mann-Whitney U

4 回答618 围观

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