实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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细胞

问【救助】请问96孔板铺的细胞少了还能拯救吗？

juyue2010

如果刚铺不久，可以的，否则就重新铺一块板，补救更合适一些。

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问博来霉素法构建肺纤维化动物模型？

huarenqiang5

【造模方法】小鼠：选用体重18～20g的雄性昆明小鼠。氯胺酮(100mg/2ml)腹腔注射(10mg/100g)，将实验动物麻醉后仰卧，纵行切开皮肤，钝性分离暴露气管，用4号针头刺入气管，尽量接近气管分叉处，将0.05ml博来霉素缓慢滴入(博来霉素每支8mg，用前以生理盐水配制成0.2％药液)，立即将动物直立旋转，使药液在肺内均匀分布，然后缝合皮肤，局部乙醇消毒防止感染。同样，也可选用雌性BLAB

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问百分之10的福尔马林固定心脏在室温下能保存多久？

loveliufudan

如果将心脏置于百分之10福尔马林固定液中，在室温下保存的时间会根据心脏的大小和福尔马林的渗透速度而异。一般来说，一个小的心脏在福尔马林中的固定时间可能只需要几天，而一个大的心脏可能需要几个星期或更长时间。通常，建议将样本放置在室温下至少48小时，以确保完全固定。但是，具体保存时间取决于固定液的浓度、样品的大小和厚度等因素，因此最好根据具体情况进行调整。同时，应当注意，福尔马林是一种有毒的化学物质，

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问请问商品化长期储存在-20°的多聚甲醛对细胞进行固定时会因为时效导致浓度改变等问题，导致对细胞通透性

秋秋欣欣

不会，多聚甲醛在-20可以保存很久

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问western blot 相关实验

huarenqiang5

考虑以下几点原因：①. 因为蛋白上样量低或目的蛋白在来源组织或细胞中的表达量并不丰富造成。可适当加大蛋白上样量，也可通过提高抗体稀释度或采用灵敏度更高的发光底物来调整，如Enlight-plus。②. 蛋白没有充分转移到膜上。转膜后可通过预染Marker判断转膜效率，也可用丽春红染膜、用考马斯亮蓝染胶，判断转膜效率。③. 抗体效价不高，用量不足，孵育时间太短，或抗体反复使用保存不当而失活。可考虑更

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问COIP实验中INPUT无目的蛋白，pulldown中能砸到目的蛋白，why？

huarenqiang5

主要考虑以下几点：（1）样品中目的蛋白未表达或者表达量低。这种情况下建议确定目的蛋白的蛋白谱，确定它会表达。（2）可以适当增加裂解液，但要注意后续要将裂解液去除干净。（3）抗体使用量少，没有足够的抗体去捕获目的蛋白。建议增加抗体的使用量。（4）缓冲液、洗脱液的pH可能不能将目的蛋白洗脱。建议根据想要洗脱的蛋白质，调整溶液正确的二pH值。（5）抗体没有与免疫吸附磁珠结合。注意查看磁珠与抗体亚型是否

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问流式细胞仪是否能鉴别和测出某一特定部位的核酸或蛋白的多少？

土井挞克树

可以用流式加荧光的方法做，荧光强度可以定量

3 回答277 围观

问求问为什么我配10%SDS溶解不了我是2g加20mL纯水，65℃加热一直无法溶解?

土井挞克树

增加温度，可能你的试验中杂质过多

3 回答2728 围观

问细胞支原体检测可以不在生物安全柜进行吗

huarenqiang5

细胞支原体检测需要在生物安全柜进行，并且需要对生物安全柜进行消毒处理。

3 回答428 围观

问meta分析直接把发病率IRR 直接当成OR值进行比较

huarenqiang5

把发病率直接当成OR值进行比较肯定不合适。

3 回答636 围观

问求问关于质粒转酵母的问题

huarenqiang5

考虑问题出在质粒上，首先需要对质粒进行电泳检测，电泳结果需为大小正确且明亮的条带；其次核对筛选培养基的选用和配制是否正确；排除上述因素，就需要复查酵母菌的外观气味是否正常，或者进行镜检。

3 回答1179 围观

问类器官病毒包装进行稳转后续不需要药筛吗？

土井挞克树

稳转后不需要做药物筛选了，前期做就可以了

3 回答176 围观

问单纯的神经元细胞会分泌炎症因子吗？

sswei

单纯的神经元细胞不能分泌炎症因子。

4 回答1059 围观

问抗体的储存：把抗体往低温放了

土井挞克树

短期低温我们影响不大，时间长的话有可能变性

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问相同的药物和通路，不同的细胞算创新吗？如果要验证药物创新的话

juyue2010

不算，老药新用，需要有新的适应症

3 回答547 围观

问请问一下，问什么蛋白表达中，集菌破碎之后，液体是黄色的，而且过完分子筛之后，跑胶之后，条带还是很杂？

loveliufudan

蛋白质表达过程中，液体颜色的黄色可能是因为存在大量的细胞裂解产物或者富含色素的蛋白质。条带杂乱的问题可能是由于目标蛋白质表达量较低，或者存在其它杂质蛋白质或者表达产物。为了解决这些问题，您可以考虑以下几点：优化菌落培养条件以提高目标蛋白质表达量。在破碎细胞时使用更加彻底的方法，如超声波或高压均质等方法，以确保细胞完全破裂释放蛋白质。使用更加纯净的蛋白质分离方法，例如磷酸盐缓冲液（PBS）或甘氨酸盐

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问流式细胞仪检测问题求助？

huarenqiang5

1、首先确认你的细胞已经从G0/G1期出来了，其次G2 S期的细胞本来就比G1的要少，你可以加个G2期阻滞的化合物做个对照。2、其次单染需要乙醇固定的时间长些，起码2小时以上，过夜也没问题。3、乙醇不能用纯乙醇，需要70％的乙醇。

3 回答737 围观

问脑组织病理

huarenqiang5

图一考虑是神经元细胞，图二考虑是胶质细胞。

4 回答409 围观

问请教各位转染CRISPR文库慢病毒的问题

juyue2010

对于每一种细胞，都有自己合适的MOI，这里说的0.3MOI是指病毒感染后30%细胞阳性。

5 回答519 围观

问冻存细胞复苏后，一直有黑点漂浮，是支原体污染吗

默然前进前行

首先，要肉眼观察培养基是否混浊，然后，在镜下观察培养细胞生长的状态，黑点是否游动。如果细胞被污染，微生物则会大量繁殖，培养基就会迅速变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。如果在镜下观察细胞，生长状态良好，与黑点出现前相比，没有任何变化，那么，黑点的出现可能与以下几种情况有关：(1)细胞生长过老，破碎的细胞残骸;(2)血清质量不好，反复冻融的结果;(3)配制培养基的pH值偏高，不宜细胞生长;

8 回答559 围观

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