实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问PCR产物双酶切构建载体，为啥很多假阳性？？？

huarenqiang5

主要考虑以下几点原因：1、模板：①模板中含有杂蛋白质； ②模板中含有Taq酶抑制剂； ③模板中蛋白质没有消化除净，特别是染色体中的组蛋白； ④在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚； ⑤模板核酸变性不彻底。2、酶失活：需更换新酶，或新旧两种酶同时使

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问3T3-L1细胞诱导。文献说，要细胞10代以下分化效果好，是复苏之后的第十代还是原代传的第十代？怀疑是细胞问题导诱导失败

sswei

应该是冻存复苏传代后分化的过程。

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问wb实验同样的操作条件和试剂，蛋白条带完全不一样，一个非常清晰一个几乎无条带，是一抗不行了吗？

balalaLy

抗体孵育时间，还有TBST的ph值也是会有影响的

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问小鼠杂交瘤细胞复苏和传代不理想，细胞难贴壁，易漂

loveliufudan

杂交瘤细胞的汇合度可以受到许多因素的影响，如细胞密度、细胞健康状态、培养条件等。在复苏过程中，细胞因保存不当可能受到了一些损伤，导致汇合度不高。此外，液体的更换也可能会对细胞产生一些影响，需要注意消毒和洗涤过程中的操作。在这种情况下，您可以尝试更改培养条件或使用不同的培养基来促进细胞生长和汇合。例如，可以尝试使用包含更多生长因子或血清的培养基，或者调整细胞密度和接种密度。此外，确保培养条件的恒定和

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问3T3脂肪细胞诱导：今天诱导第七天，老师们帮我看下，这是成功了还是失败了？这小白泡是脂滴吗？

dxyc42u

看图片中算是诱导成功了，效果不错

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问有机溶剂样品用水系膜过滤，会有啥影响

sswei

水系滤膜只能用于水溶液，不能用有机溶剂，否则滤膜会溶解。

5 回答3665 围观

问染色液晶体析出，染色效果不佳

sswei

染色过程中，因温度降低、成由于物质溶解度减小而导致晶体析出。

4 回答357 围观

问毕赤酵母表达跨膜蛋白

huarenqiang5

可能的原因有：1、上样时没有目的蛋白，可能是1)没表达2)亲和层析时没洗脱或是穿透了;2、目的蛋白结合在FPLC柱子上没被洗脱;3、目的蛋白穿透FPLC柱子，在FPLC上看到的大峰可能是盐分峰;4、电泳时没跑好,目的蛋白没被检测到。5、要看吸收值，如果吸收值不高的话就是蛋白的浓度太低,浓缩后再跑电泳。

4 回答710 围观

问GEPIA分析的基因表达图如何得到P值

土井挞克树

如果是GEPIA分析的话有p值选项的，你需要把选项勾选就可以显示了

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问coIP/抗原抗体过夜有沉淀/非特异

loveliufudan

您可以尝试以下几个方法：优化裂解液成分和pH值减少孵育时间和温度在加入磁珠前离心取上清，并且在加入磁珠后再次离心去除残留絮状物

3 回答550 围观

问转录组分析

loveliufudan

如果你想要获取上调前20%的基因，你可以根据Log2FoldChange从大到小进行排序，然后取前20%的基因。例如：共有100个上调基因，对这些基因根据Log2FoldChange从大到小进行排序，然后取前20个基因。但是，仅仅根据Log2FoldChange来筛选差异表达基因可能不够准确，还需要考虑FDR（错误发现率）这个指标。FDR是通过对p值进行校正得到的，反映了差异表达分析中假阳性的概率

4 回答595 围观

问NS0细胞培养

龙大人驾到

如果NSO细胞系一直无法培养成功，可能需要检查以下几个方面：1. 培养条件是否正确：包括温度、CO2浓度、培养液配方和pH值等。确保所有条件都符合NSO细胞系的生长要求。2. 细胞培养技术：NSO细胞系很敏感，需要专业的细胞培养技术，包括细胞解冻、传代、分离、传染等等。确保操作过程中无菌且温和。3. 起始细胞质量：NSO细胞系对起始细胞的质量要求比较高，起始细胞应该是健康的、纯度高的。4. 检测污

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问关于病例对照研究和队列研究文章怎么分类的疑惑

huarenqiang5

把患者分为mvi阳阴性两组进行多因素分析，没有随访就不是病例对照研究。病例对照研究（case-control study）是以当前已经确诊的患有某特定疾病的一组病人作为病例组，以不患有该病但具有可比性的一组个体作为对照组，通过询问、实验室检查或复查病史，搜集研究对象既往对各种可能的危险因素的暴露史，测量并采用统计学检验，比较病例组与对照组各因素暴露比例的差异是否具有

3 回答286 围观

问可以看见明显趋势但actin不齐可以用吗

balalaLy

应该不行，NC组的内参太糊了，跟过表达差异那么大，这种情况会被质疑你的转染本身对细胞有影响。建议调一下上样量再跑一次

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问茜素红多聚甲醛存放

dxy_xextz7w2

我们一般都是染色后拍完照片然后加试剂再测一下吸光度值就报废了，不会再继续保存

4 回答520 围观

问斑马鱼肠道切片

sswei

在熬蜡过程中使用温度过高也会引起气泡。

3 回答980 围观

问噬菌体保存

sswei

不当的保存方法会降低噬菌体的效价，要严格按照说明书进行操作。

4 回答2333 围观

问使用trizol法提取秀丽隐杆线虫的总RNA,线虫老是裂解不充分,呈现为一条线,想请教一下大家都是怎么裂解的?

whilt-shirt

可以考虑使用高通量组织研磨器匀浆后提前RNA

4 回答1347 围观

问Cox回归中的亚组分析是如何做的？

sswei

数据填入错误，导致不能得出结果。应填入对应的T1数据。

3 回答2640 围观

问药物浓度选择

loveliufudan

您可以尝试使用药物的半数有效浓度（EC50）进行后续实验。EC50是药物能够引起所需反应的一半最低有效浓度，即药物的有效性的一种量化指标。在药物的浓度-反应曲线上，EC50可以通过将反应与药物浓度之间的曲线进行拟合而获得。选择EC50浓度可以在保证药物有效性的前提下，最大限度地减少药物的浪费和成本。

3 回答1246 围观

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