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        流式区分死活细胞

        相关实验:流式细胞仪标本制备

        user-title

        dxy_4eaofxa0

        如果我想用DAPI,或者PI区分死活细胞,可以先染DAPI或PI,在进行固定吗。如果这样操作,会导致所有的细胞都染上色以至于无法区分死活细胞

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        4 个回答

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        DAPI和PI都是DNA染料,可以用来区分死活细胞。

        死细胞的质膜完整性受损,导致DNA染料可以进入细胞核并与DNA结合,发出荧光信号。

        活细胞的质膜完整性正常,阻止DNA染料进入细胞核,因此不会发出荧光信号。

        如果你想用DAP或PI区分死活细胞,你应该先进行固定再进行染色。

        如果你先染色再固定,会导致所有的细胞都发生渗透性增高,结果就是所有的细胞都染上色以至于无法区分死活细胞。

        如果你需要检测胞内抗原而不得不破膜的标本中,这时就没法用DAP或P1来区分死细胞了。

        这时候你可以考虑使用蛋白结合染料来区分死活细胞。

        蛋白结合染料可以与质膜上的氨基反应,并且对固定没有敏感性。

        user-title

        huarenqiang5

        有帮助

        是的,这样操作会导致所有的细胞都染上色而无法区分死活细胞。

        user-title

        sswei

        有帮助

        流式细胞仪法用来判断细胞死活的常用荧光探针有二大类:一类是能透过活的细胞膜进入细胞内而发出荧光的物质,例如FDA可被活细胞持留而发出黄绿色荧光,若细胞有损伤则会从细胞中流失,观察不到荧光.另一类是不能透过活细胞膜,但能对固定的细胞及膜有破损的细胞的核进行染色,例如碘化丙啶( PI,Propidium iodide )和溴化乙锭( EB,Ethidium bromide )就是常用的第二类荧光探针.碘化丙啶(PI)不能穿透细胞膜,对于具有完整细胞膜的正常细胞或凋亡细胞不能染色.而对于坏死细胞,其细胞膜的完整性丧失,碘化丙啶(PI)可以染色坏死细胞.目前常用的一种细胞凋亡与坏死检测试剂盒则含有Hoechst 33342和碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)两种荧光染料.细胞发生凋亡时,染色质会固缩,Hoechst 33342可以穿透细胞膜,染色后凋亡细胞荧光会比正常细胞明显增强.上述两种染料双染后,使用流式细胞仪或荧光显微镜检测时,正常细胞为弱红色荧光+弱蓝色荧光,凋亡细胞为弱红色荧光+强蓝色荧光,坏死细胞为强红色荧光+强蓝色荧光。

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        可以先染DAPI或PI,再进行固定。

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