实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问研究对象为某植物，但没有全基因组，该植物目前也没有目标基因的序列，请问该如何设计引物呢？

loveliufudan

如果您想验证研究对象中是否存在某个目标基因，您可以尝试使用PCR或其他分子生物学技术来扩增和检测该基因的存在。以下是可能的步骤：从研究对象中提取DNA。设计引物：您可以使用其他已知植物中的该基因序列来设计引物，以便在研究对象中扩增目标基因。您可以使用多序列比对软件来确定引物的特异性。进行PCR反应：使用所设计的引物进行PCR反应，以扩增目标基因。反应条件可以根据引物长度和序列调整。分析PCR产物：

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问水合半径用什么仪器检测？

土井挞克树

一般来说，水化半径可以通过测量液滴的表面张力来确定。由于液滴的表面张力和它的表面能有关，所以可以通过测量液滴表面能来估算水化半径。另外，还可以通过电镜观察液滴的外观来估算液滴的水化半径。此外，还可以采用像半径测量仪等仪器来直接测量液滴的半径。

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问提细胞蛋白，裂解离心之后，离心管里的沉淀是什么？

loveliufudan

在细胞裂解和离心的过程中，离心管里的沉淀可能是细胞的细胞器、膜片段、细胞骨架等细胞内结构，以及细胞中的蛋白质、核酸等生物大分子。具体来说，如果你是提取全细胞蛋白，则沉淀中会含有细胞核、线粒体、内质网、高尔基体、溶酶体等细胞器以及膜片段、细胞骨架等细胞内结构。同时，还会含有细胞中的蛋白质、核酸等生物大分子。如果你是提取特定的蛋白质，则沉淀中只会含有该蛋白质所在的细胞器、结构或特定的蛋白质。需要注意的

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问分离病毒WB能够检测到病毒蛋白的条带，但为什么基因组始终检测不到？

土井挞克树

可能是基因含量过小，比如片段kb小就不容易检测到

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问如何查询一个菌属的名称和作用

土井挞克树

1.这里我们需要使用网站https://www.uniprot.org，首先打开网页；2、点击搜索选项，选择生物学分类（taxonomy）；3、输入自己想要查询的菌名称（英文名称），并点击搜索或者按回车；4、查看自己的查询结果，菌群分类从大到小分为“门（(phylum）”、“纲(class)”、“目(order)”、“科(family)”、“属(genes)”、“种(genes)”。

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问免疫组化的问题求助？

sswei

DAB显色时间不是固定的，主要由显微镜下控制显色时间，到出现浅棕色本底时即可冲洗；DAB显色时间很短（如几秒或几十秒）就被覆盖，这很可能说明你的抗体浓度过高或抗体孵育时间过长，需要下调抗体浓度或缩短你的抗体孵育时间；此外，若很短时间就出现背景很深，还有可能你前面的封闭非特异性蛋白不全，需要延长封闭时间。

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问求小鼠UUO模型制作过程详细过程视频等？

sswei

小鼠的输尿管结扎其实和大鼠差不多，如果比较精细的话，建议在显微镜下操作，不需要分离输尿管，只要找到输尿管，使用带针的显微缝针从输尿管下穿过并用丝线结扎就可以了。单侧输尿管结扎是主要看肾小管间质纤维化的模型。有两种方法；从正中切口进入，然后在左肾下极处的输尿管处结扎或者结扎后剪断该侧输尿管。或者背部进入，在左肾下极处的输尿管处结扎或者结扎后剪断该侧输尿管。比较而言，第二种方法比较好。

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问求助免疫细胞的免疫组化

sswei

蛋白质水平的多重免疫组织化学（mIHC）和多重免疫荧光（mIF）能分析、量化肿瘤中免疫细胞亚群、其功能状态及其在肿瘤微环境中的空间排列等，是目前检测肿瘤微环境免疫状态的核心技术。免疫组织化学（IHC）可以区分TME内表达相同蛋白质的不同细胞类型，并且可以描述其密度和空间分布。IHC还可以提供标记强度的定量评估。

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问大佬们，想问问提取上清液的分泌蛋白之后怎么测得它的基因组序列蛋白质序列呀

土井挞克树

提取后离心纯化，然后做免疫组化测蛋白序列

3 回答310 围观

问六孔板每孔密度传的不均匀会影响药物干预效果嘛？

土井挞克树

密度不均匀是会影响的，需要先统一密度再转移到孔板里面

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问荧光PCR上板一定得设置复孔吗？

土井挞克树

一定要设置复孔，一般是3个，且需要做三批以上

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问热蛋白组学实验，用TMT标记的话，每个点大约需要裂解几百万细胞

土井挞克树

1ml是可以的，蛋白浓度不会太高。

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问0.1mol/l PH=7.0的磷酸缓冲液溶液怎么配置？

土井挞克树

甲液：NaH2PO4·2H2O：Mr=156.03，0.2mol/L溶液为31.21g/L，NaH2PO4·H2O：Mr=138.01，0.2mol/L溶液为27.6g/L。乙液：Na2HPO4·2H2O：Mr=178.05，0.2mol/L溶液为35.61g/L，Na2HPO4·7H2O：Mr=268.13，0.2mol/L溶液为53.624 g/L ，Na2HPO4·12H2O：Mr=358.

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问目的条带有被拉下来但是重新把膜洗了然后敷另一个对照抗体，ip就没有😭会是什么问题呀

loveliufudan

目的条带被拉下来可能是由于膜的处理、处理时间、电泳条件等因素导致的。重新将膜洗一遍可以去除非特异性的结合，但如果之前处理膜的步骤不正确，则可能仍然会影响结果。对照抗体能够成功进行IP说明IP反应本身没有问题，但仍需要对之前目的抗体的IP反应进行分析，可能的问题包括：目的抗体的选择是否正确：如果目的抗体不特异，则可能会出现假阳性的结果或者非特异性的结合，导致目的条带的拉下或者不明显。在选择目的抗体时

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问对分泌蛋白进行检测除了elisa 蛋白免疫印记还可以用什么？

土井挞克树

还可以做wb实验，免疫荧光化学等实验

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问BM–DC好难诱导条件摸了无数次

sswei

有许多方法可进行。Lutz法与Son法相似，均可大量制备BMDC。Lutz法与Inaba经典方法和Son法的最大不同是使用细菌培养皿（Petri dish）而非细胞培养板来培养骨髓细胞。Ⅰnaba法是细菌培养皿不容易使骨髓中的巨噬细胞贴壁，从而抑制巨噬细胞的发育，进而避免巨噬细胞对DC成熟的抑制作用，这可能是该法能够以较低铺板密度获得大量 BMDC 的主要原因。但该法的培养时间较长，需要10-

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问如何分离外周血NK细胞和单核细胞

土井挞克树

目前主要的分离方法是Ficoll-hypaque（葡聚糖－泛影葡胺）密度梯度离心法，因为血液中各有形成分的比重存在差异最多12天，但需要刺激。

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问抗体为什么敷完之后底板老出现黑乎乎的一团

土井挞克树

抗体浓度过大或者孵育时间太长就会黑乎乎一团

4 回答215 围观

问请问做WB时出现这种情况是什么原因

申东熙老伯

样品浓度过高loading跑不下去，可以多加点loading稀释一下。

4 回答320 围观

问做免疫荧光的玻片怎么处理才比较好呢？为什么放入玻片爬片后就染菌了呢？

申东熙老伯

可以用免洗的细胞爬片做免疫荧光，如果不是免洗的玻片可以在使用之前用镊子夹着过一遍火。

4 回答374 围观

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