请问这种泳道内部背景很黑是啥原因呢？跑了好几次都这样😭抗体是新配制的，用的是半干转20伏28分钟

背景黑可能有以下几个原因:

1.没有封闭好,但这个可能很小

2.一抗浓度太高,适当降低增加一抗稀释比例

3.二抗孵育时间太长,一般室温45min,二抗切不可孵育时间太长

背景太高，抗体浓度太大的原因。

以下是可能的一些原因：

过度曝光：如果将蛋白质样品暴露在过高的光强下，会导致背景过度暗淡。您可以尝试减少暴露时间或降低光强来解决此问题。

样品准备问题：如果样品中存在过多的杂质或未被彻底清洁干净，可能会导致背景过度暗淡。您可以尝试更仔细地清洁您的试管、移液器等，或更改您的样品制备方法。

抗体结合问题：如果抗体与蛋白质样品结合不充分或者结合了不应结合的蛋白质，可能会导致背景过度暗淡。您可以尝试优化抗体的使用浓度或更换抗体，确保其与目标蛋白的结合特异性。

蛋白质样品的数量问题：如果蛋白质样品过少或者过多，可能会导致背景过度暗淡。您可以尝试优化蛋白质的用量来解决此问题。

膜污染：如果使用的膜污染或老化，可能会导致背景过度暗淡。您可以尝试更换新的膜或者对膜进行更好的保存。