提质粒时最后一步加Elution Buffer洗脱，如果没加好加到壁上导致最后的质粒少，会有什么影响吗？可以在离心前多加EB吗？

不建议，这种情况最好采用多次洗脱尽可能把质粒洗脱下来，然后再进行离心。

如果没加好加到壁上导致最后的质粒少，会未提出质粒或质粒得率较低。多加EB会对质粒回收率减少。

如果在提取质粒时未将Elution Buffer彻底加入壁上，可能会导致一些未被溶解的DNA残留在壁上，从而导致纯化后的质粒DNA量减少。

在离心前添加更多的Elution Buffer可能会有所帮助，但是需要注意的是，如果添加过多的Elution Buffer可能会导致质粒DNA的浓度过低，从而影响后续实验的结果。因此，建议在离心前仅添加足够的Elution Buffer以确保所有DNA都被溶解并彻底释放到Elution Buffer中。

如果您发现在提取质粒时未能彻底加入Elution Buffer，并且您已经离心并保存了DNA溶液，请注意在后续实验中注意质粒DNA的数量和质量。如果您的质粒DNA浓度较低，可以尝试使用更高的浓度进行实验。