实验问答

21,829,446 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

全部

细胞

问求助免疫细胞的免疫组化

sswei

蛋白质水平的多重免疫组织化学（mIHC）和多重免疫荧光（mIF）能分析、量化肿瘤中免疫细胞亚群、其功能状态及其在肿瘤微环境中的空间排列等，是目前检测肿瘤微环境免疫状态的核心技术。免疫组织化学（IHC）可以区分TME内表达相同蛋白质的不同细胞类型，并且可以描述其密度和空间分布。IHC还可以提供标记强度的定量评估。

2 回答482 围观

问大佬们，想问问提取上清液的分泌蛋白之后怎么测得它的基因组序列蛋白质序列呀

土井挞克树

提取后离心纯化，然后做免疫组化测蛋白序列

3 回答286 围观

问六孔板每孔密度传的不均匀会影响药物干预效果嘛？

土井挞克树

密度不均匀是会影响的，需要先统一密度再转移到孔板里面

3 回答767 围观

问荧光PCR上板一定得设置复孔吗？

土井挞克树

一定要设置复孔，一般是3个，且需要做三批以上

5 回答1671 围观

问热蛋白组学实验，用TMT标记的话，每个点大约需要裂解几百万细胞

土井挞克树

1ml是可以的，蛋白浓度不会太高。

4 回答166 围观

问0.1mol/l PH=7.0的磷酸缓冲液溶液怎么配置？

土井挞克树

甲液：NaH2PO4·2H2O：Mr=156.03，0.2mol/L溶液为31.21g/L，NaH2PO4·H2O：Mr=138.01，0.2mol/L溶液为27.6g/L。乙液：Na2HPO4·2H2O：Mr=178.05，0.2mol/L溶液为35.61g/L，Na2HPO4·7H2O：Mr=268.13，0.2mol/L溶液为53.624 g/L ，Na2HPO4·12H2O：Mr=358.

4 回答6265 围观

问目的条带有被拉下来但是重新把膜洗了然后敷另一个对照抗体，ip就没有😭会是什么问题呀

loveliufudan

目的条带被拉下来可能是由于膜的处理、处理时间、电泳条件等因素导致的。重新将膜洗一遍可以去除非特异性的结合，但如果之前处理膜的步骤不正确，则可能仍然会影响结果。对照抗体能够成功进行IP说明IP反应本身没有问题，但仍需要对之前目的抗体的IP反应进行分析，可能的问题包括：目的抗体的选择是否正确：如果目的抗体不特异，则可能会出现假阳性的结果或者非特异性的结合，导致目的条带的拉下或者不明显。在选择目的抗体时

4 回答262 围观

问对分泌蛋白进行检测除了elisa 蛋白免疫印记还可以用什么？

土井挞克树

还可以做wb实验，免疫荧光化学等实验

4 回答908 围观

问BM–DC好难诱导条件摸了无数次

sswei

有许多方法可进行。Lutz法与Son法相似，均可大量制备BMDC。Lutz法与Inaba经典方法和Son法的最大不同是使用细菌培养皿（Petri dish）而非细胞培养板来培养骨髓细胞。Ⅰnaba法是细菌培养皿不容易使骨髓中的巨噬细胞贴壁，从而抑制巨噬细胞的发育，进而避免巨噬细胞对DC成熟的抑制作用，这可能是该法能够以较低铺板密度获得大量 BMDC 的主要原因。但该法的培养时间较长，需要10-

3 回答538 围观

问如何分离外周血NK细胞和单核细胞

土井挞克树

目前主要的分离方法是Ficoll-hypaque（葡聚糖－泛影葡胺）密度梯度离心法，因为血液中各有形成分的比重存在差异最多12天，但需要刺激。

4 回答742 围观

问抗体为什么敷完之后底板老出现黑乎乎的一团

土井挞克树

抗体浓度过大或者孵育时间太长就会黑乎乎一团

4 回答202 围观

问想问一下为什么提的rna跑出来的条带都是这样的。理论值应该是28s:18s为2:1，但是胶图上却不是这样子的。

loveliufudan

可能有以下几个原因：样本不纯：如果你的RNA样本中存在DNA、蛋白质、盐类、酶或其他杂质，可能会影响RNA的电泳结果，导致28S和18S RNA带比例不正确。你可以通过琼脂糖凝胶电泳前对RNA样本进行纯化来解决这个问题。样本降解：如果RNA样本不完整或已经降解，可能会影响28S和18S RNA带的比例。这种情况下，你可能会看到28S RNA带出现双峰，18S RNA带的强度减弱。你可以通过在RNA

3 回答1194 围观

问请问做WB时出现这种情况是什么原因

申东熙老伯

样品浓度过高loading跑不下去，可以多加点loading稀释一下。

4 回答301 围观

问运用Ti离子比色法测定水稻根系泌氧能力时，能否直接大田试验，不用水培法培养水稻？

loveliufudan

Ti离子比色法是一种常用的测定植物根系泌氧能力的方法，通常需要使用水培法培养水稻根系，以获得相对稳定的实验结果。在大田试验中直接进行Ti离子比色法测定水稻根系泌氧能力可能会受到多种因素的干扰，如土壤物理化学性质、微生物群落、根系发育情况等，导致实验结果的可靠性不高。因此，建议您在进行Ti离子比色法测定水稻根系泌氧能力之前，先在室内使用水培法培养水稻，使其形成相对稳定的根系，然后再进行实验。如果您想

3 回答380 围观

问体外培养间充质细胞这是什么细胞污染?

loveliufudan

可以考虑这是细菌污染。具体来说，可能是一些革兰氏阴性菌，如肠杆菌等。建议进行以下措施：进行培养液的无菌筛查：可以将培养液分别接种到无菌的富集培养基上（如LB富集培养基），并在适当的温度和时间下培养，观察是否有细菌生长。观察细胞形态：可以进行显微镜观察，观察细胞的形态是否发生了变化。细菌污染会导致细胞形态的改变，如细胞缩小、细胞形态不规则等。采取消除污染的措施：如果确认存在细菌污染，可以尝试使用消毒

5 回答324 围观

问做免疫荧光的玻片怎么处理才比较好呢？为什么放入玻片爬片后就染菌了呢？

申东熙老伯

可以用免洗的细胞爬片做免疫荧光，如果不是免洗的玻片可以在使用之前用镊子夹着过一遍火。

4 回答339 围观

问免疫沉淀实验干扰的排除方法？

loveliufudan

在免疫沉淀实验中，有时候靶蛋白的大小与重链或轻链相近，会影响靶蛋白的检测。针对这种情况，有一些方法可以尝试：使用预先交叉吸附（Pre-Clearing）：在进行免疫沉淀之前，先用抗体（不是用于靶蛋白的抗体）与细胞裂解物进行结合，通过离心将这些抗体结合的蛋白质沉淀掉。这样可以减少重链和轻链的干扰，提高靶蛋白的检测灵敏度。选择性减少重链或轻链的信号：使用特异性抗体或是特异性减少重链或轻链信号的方法。例

4 回答445 围观

问免疫荧光图片拍摄好之后，一般可以保存多长时间呢

sswei

免疫荧光图片拍摄好之后如必须保存时，则应保持干燥，置4℃以下保存。一般细菌涂片或器官组织切片经固定后可保存一个月以上。但病毒和某些组织抗原标本抗原性丧失很快，数天后就失去其抗原性，需在-20℃以下保存。

4 回答7058 围观

问请教一下qPCR报错的问题

loveliufudan

该PCR结果中包含了多种错误提示，每个提示都可能有不同的原因和解决方法。以下是一些常见的问题及其解决方法：PRFDROP - Passive reference signal changes near CT：被标记为PRFDROP的孔的被动参考信号在CT附近发生了显著的变化，可能是由于样品或仪器问题导致的。解决方法是检查仪器和实验操作是否正确，并确保样品中的RNA/DNA质量和浓度正常。NOAMP

2 回答3807 围观

问看海绵宝宝的眼睛👀，这是什么菌？

土井挞克树

还是像霉菌，丝状霉菌的可能性大

5 回答532 围观

关于丁香通

公司信息

个人用户

企业机构

无忧采购轻松科研

提问

扫一扫

实验小助手

扫码领资料

反馈

TOP

打开小程序