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实验问答

27,850,413 科研人在看

问一个基因有三个转录变体，克隆基因时会对测序结果造成影响吗，影响克隆基因吗

huarenqiang5

一个基因有三个转录变体时可以用以下两种方法进行基因测序： 1.设计CDS引物，通过提取组织RNA，并设计相应引物，运用PCR的方法获得目的基因CDS序列，连接到克隆载体后，挑取单克隆进行测序。这种方法相对成本较低，但是PCR过程可能引入突变。适合基因CDS序列较短的情况。 2.全基因合成：根据目的基因的CDS序列，直接交给公司设计合成目的基因。此方法优点准确

3 回答529 围观

问为什么紫外分光光度法透光率会上升？

sswei

可能存在环境温度异常，强的照明或不稳定环境下工作等情况。

4 回答807 围观

问根系泌氧（rol）具体测定方法

sswei

柠檬酸钛液体的制备方法，包括以下步骤：S1.烧杯中加入蒸馏水，将柠檬酸倒入烧杯中，并同时搅拌，至柠檬酸完全溶解，再向该溶液中滴加四氯化钛盐酸溶液，同时搅拌，保持烧杯内的温度在25℃，连续搅拌20分钟；S2.向S1中的烧杯内加入氯化铁，搅拌2分钟后加入氯化锌，再次搅拌2分钟后加入二氧化锰，再搅拌2分钟后加入硼酸，搅拌2分钟；S3.向配置好的溶液内缓慢加入乙醇，搅拌，不定时的使用pH剂检测溶液的

4 回答2352 围观

问小鼠蔗糖饮水实验瓶子漏水怎么办呀

sswei

糖水偏好测试过程中偶尔会存在饮水瓶漏水的现象，这种情况有可能是实验员操作失误，有可能是饮水瓶位置放置不正确，也有可能是动物舔水过程中无意泄漏的，这些现象很多时候可能会导致在规定时间内获取的动物舔水摄入量差异不明显（动物单次饮水量本就很有限），这个时候用户可以选择糖水偏好测试仪的计算出的动物舔水次数、饮水时间、舔水频率等数据来参考统计，或许是另一条评估的好思路。最重要的是在正常实验前一定要检查好水瓶

4 回答949 围观

问4T1细胞培养，培养瓶内不明区域性黑点，会影响细胞吗？求助！

dxy_8qhx1717

可能是黑胶虫，数量少对细胞影响不大，数量多会使细胞状态极差，不能用于后续实验。黑胶虫一般产生的原因，可能是环境污染，或者试剂污染，或者培养基血清污染。黑胶虫一般极难去除，一旦发现可能会影响整个细胞培养系统，建议全面消毒细胞实验室，购买新细胞。

6 回答502 围观

问细胞骨架免疫荧光染色分析细胞迁移问题

huarenqiang5

不能用这种方法比较实验组和对照组的细胞迁移能力。

3 回答449 围观

问想问一下懂行的大佬，最近在用crisper cas9做基因的片段敲除，敲的是一株产油酵母里的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因。

huarenqiang5

敲除效率受多方面因素影响，建议从以下几点考虑： 1.基因敲除靶点应设计在起始密码子附近（包括起始密码子）或者起始密码子下游的外显子范围内。 2.不同靶点在基因敲除效率上有较大差异，因此同时设计构建 2～3 个靶点的基因敲除载体再从中选出敲减效果较佳的靶点。 3.N1-N20NGG 靠近 PAM 的碱基对靶点的特异性很重要，前 7～12 个碱基的错配对 Cas

3 回答679 围观

问蛋白对接Zdock中蛋白过大问题

huarenqiang5

蛋白大分子按以下步骤进行预处理：1 在执行vina分子对接过程中，主要的预处理软件事Autodock tools这个软件，前面我们已经介绍过其安装过程，首先打开这个软件；2 应用该软件打开已经准备好的蛋白分子，注意要放在我们指定的文件夹中；3 对该蛋白分子进行加氢反应；4 选择所有的氢原子，点击OK；5 计算蛋白得电荷；6 然后将蛋白保存为PDB格式就好，这个蛋白分子是已经加氢完毕；7 可以直接替

3 回答3458 围观

问求助胚胎免疫荧光问题？

huarenqiang5

是的，为了实验结果准确建议提前去除透明带。

4 回答728 围观

问免疫荧光PB浓度问题求助？

huarenqiang5

切片染色清洗时PB浓度建议用0.01的更好。

4 回答546 围观

问microrna载体构建

loveliufudan

miRNA的前体是一段长链RNA，通常会被Drosha核酸酶和Dicer核酸酶剪切成成熟的miRNA分子。在构建miRNA过表达载体时，需要将miRNA的前体序列插入到适当的载体中，以实现高水平的miRNA表达。在设计前体引物时，需要遵循以下原则：引物长度：miRNA的前体长度一般在100到300nt之间，因此前体引物的长度应该在200到500bp之间，以确保充分覆盖前体序列。引物序列：在设计前体

2 回答1244 围观

问cat酶活性计算问题

huarenqiang5

是的，是每个样品的最后一分钟吸光度，建议多次几次然后取平均值这样结果更精准。

3 回答926 围观

问为什么所有试剂和检测样本要平衡至室温后再进行加样操作

huarenqiang5

因为这样试剂和检测样本的稳定性好，利于实验，使实验结果更精准。

4 回答464 围观

问用FITC和用Cy3标记的二抗除了在颜色上有区分外，其他方面还有区别吗？比如说特异性和敏感性方面。

huarenqiang5

FITC和Cy3各自标记的二抗主要是在颜色上区别较大，而在特异性和敏感性没有大的区别。

3 回答736 围观

问在实验中，特别是在修复后切片容易脱片，切片脱片的原因是什么？

申东熙老伯

切片脱片可能是抗原修复时未等待修复液完全恢复到室温就封闭或者抗原修复时在修复液离泡太久。

4 回答890 围观

问免疫组化检测时，如何控制显色背景？

huarenqiang5

1、每一步一定要充分清洗，做细胞培养片子时，要避免冲洗液直接冲到细胞上，以防将细胞冲走。2、控制好DAB染色时间，最好在显微镜下控制时间，在我们的实验过程中，发现DAB染色时间与书上描写的（要求5-15分钟）差异很大，一般120秒就开始变色，时间过长将出现明显的假阳性结果。3、一抗的浓度不能太高,否则会竞争性拮抗.但也不能太低,每次冲洗要把水吸干,否则会人为地降低浓度。4、一抗如果是单抗的话，建议

3 回答631 围观

问请问如何对双组分系统中的反应调节蛋白上的Asp进行体外磷酸化？

sswei

根据磷酸氨基酸残基的不同，磷酸化蛋白可分为4类：O-磷酸蛋白、N-磷酸蛋白、酰基磷酸蛋白和S-磷酸蛋白。蛋白质磷酸化的研究方法最广泛使用的技术是Western-blot，质谱和同位素标记结合免疫印迹-化学发光分析，Phos-tagTM SDS-PAGE。

3 回答1360 围观

问细胞程序性死亡与调节性死亡的区别

sswei

细胞程序性死亡（programmed cell death，PCD）是一种基因指导的细胞自我消亡方式。P程序性细胞死亡的亚型包括细胞凋亡、自噬和坏死性凋亡。调节性细胞死亡涉及效应分子参与的信号级联反应，具有独特的生化特征、形态特征和免疫学后果；其中发生在生理条件下的调节性细胞死亡也被称为程序性细胞死亡(PCD)

3 回答3646 围观

问请问诱导用的IL-4是人源的还是鼠源的？

huarenqiang5

诱导用的IL-4人源和鼠源的都可以。自己可以根据实验目的和要求进行选择。

5 回答1168 围观

问想请教一下用线虫测过抗氧化相关试剂盒的大佬,你们测定时是怎样取样本进行测定的,是直接将虫子收集超声破碎后取上清进行测定的吗？

晴空a

用组织捣碎机 10000～15000 转/分上下研磨制成 10%组织匀浆。将制备好的 10%匀浆液用普通离心机或低温低速离心机 4000 转/分左右,离心 10～15 分钟，取上清液进行测定。

4 回答1446 围观

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