实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问一个基因有三个转录变体，克隆基因时会对测序结果造成影响吗，影响克隆基因吗

huarenqiang5

一个基因有三个转录变体时可以用以下两种方法进行基因测序： 1.设计CDS引物，通过提取组织RNA，并设计相应引物，运用PCR的方法获得目的基因CDS序列，连接到克隆载体后，挑取单克隆进行测序。这种方法相对成本较低，但是PCR过程可能引入突变。适合基因CDS序列较短的情况。 2.全基因合成：根据目的基因的CDS序列，直接交给公司设计合成目的基因。此方法优点准确

3 回答320 围观

问请问各位前辈，请问LY294002溶液如何配置呀,是先用DMSO配成母液然后再加吐温80，PEG300和水稀释吗？

huarenqiang5

先用100%DMSO溶解，然后用的时候1000倍稀释灌流。

4 回答627 围观

问各位大佬，胫骨怎么提取rna啊。

huarenqiang5

可以借鉴以下步骤和方法：小白鼠6只，雄性，4周龄，体重20-30 g。采用脱颈法处死，迅速解剖剥离双侧胫骨组织，用生理盐水冲洗干净，放于液氮中保存。1.骨RNA提取第一组(对照组):随机称取25 g的骨组织3份，在标准条件下用传统Trizol法一步裂解，氯仿纯化、异丙醇沉淀、乙醇再纯化，干燥后得到3份RNA沉淀，每份加入10uL DEPC水溶解。第二组(改良组):随机称取25g的骨组织3份放入2m

4 回答888 围观

问RNA琼脂糖电泳四根条带?

huarenqiang5

从图片及操作综合分析考虑最后一根是降解产物。

4 回答2926 围观

问请问如果我的细胞需要经过刺激之后给药，那么在小室接种细胞时，这个细胞是给药和刺激完成后再接种到小室中

loveliufudan

这取决于你的实验设计和研究目的。如果你的目的是研究给药和刺激后细胞的生物学响应，那么你需要先刺激和给药，然后将细胞接种到小室中进行观察。如果你的目的是研究细胞在给定条件下的反应，那么你可以先将细胞接种到小室中，然后进行刺激和给药。在任何情况下，你需要注意细胞的状态和实验条件，以保证实验结果的可靠性。

4 回答202 围观

问做的胶体金试剂放久了会出现色浅？主要是什么原因？

huarenqiang5

主要原因有：1.被标记蛋白液中含有过高的盐离子。2.T线包被的抗体或者抗原的量过低或者提高胶体金的标记量过低。3.样垫的PH值，PH值越低，颜色越深，所以，包被液的PH值和胶体金标记的PH值也可以降低一下。4.使用胶体金颗粒的大小不合适，颗粒越大，颜色越深，但是，特异性会变弱。

4 回答1200 围观

问有哪些因子参与免疫球蛋白的类型转换？

huarenqiang5

主要有Th1细胞因子IL-2、IL-12、IFNγ；Th2细胞因子主要是IL-4、IL-5、IL-6、IL-10参与免疫球蛋白的类型转换。

4 回答606 围观

问像VH2-1具体是什么意思，重链可变区，那2-1是什么含义呢？

loveliufudan

“VH”表示重链可变区（variable region of heavy chain），“2”表示第二个可变区域，而“1”则可能表示第一个亚区（subregion）。重链可变区是免疫球蛋白分子中一个重要的区域，可以影响抗体与抗原的结合特异性和亲和力。

3 回答306 围观

问VH基因家族包括什么？其临床意义是什么

loveliufudan

VH基因家族是免疫球蛋白（Immunoglobulin，Ig）的重链可变区（VH）基因的一个家族，其中包括了多个互相关联的基因。这些基因编码重链可变区域，这是Ig分子的一部分，也是抗体的可变部分，负责与抗原结合。VH基因家族是高度多样化和可变的，以便Ig分子可以结合到各种各样的抗原上。人类VH基因家族被分为7个亚家族（VH1-VH7），每个亚家族包含了多个基因。不同的VH基因家族在其序列和结构方面

3 回答1203 围观

问请问同一个逆转录试剂盒能够既做小鼠RNA的逆转录又做人类RNA的吗？

loveliufudan

一般情况下，同一个逆转录试剂盒可以用于逆转录不同来源的RNA，包括小鼠RNA和人类RNA。这是因为逆转录试剂盒中的逆转录酶通常是通用的，能够逆转录各种来源的RNA。然而，对于某些特殊的RNA，如长RNA、短RNA、mRNA等，可能需要特定的逆转录试剂盒才能更好地逆转录。此外，逆转录试剂盒的反应体系中也包含了其他辅助试剂，如缓冲液、酶切剂、核酸酶抑制剂等，这些试剂可能会对反应的特异性、效率和准确性产

4 回答281 围观

问苏木素复染过程中，如果染色不理想可以补救吗？怎么补救？

huarenqiang5

能够进行补救，染色深则分化时间稍长些即可；染色浅则再置于苏木素中染色即可。

4 回答947 围观

问实验过程中，切片上有一些空余的地方会非特异性吸附抗体，造成后续结果的假阳性，怎么才能避免这种情况？

huarenqiang5

进行封闭后然后再进行一抗孵育这样可以有效避免假阳性的发生。

5 回答199 围观

问实验过程中，石蜡切片染色过程中总是出现脱片现象，怎么有效避免？

huarenqiang5

一般来说，如果用多聚赖氨酸包被过的片子做正常免疫组织化学染色的话是不会掉片子的。但如果要做抗原修复的话，如果片子处理不好的话是有可能掉片子的。可以试试一下的方法：a.我们一般用APES：丙酮=1:50的处理液来处理片子，处理5min左右，然后水洗，烘干既可用于贴片。如果把水滴再处理好的片子上，水比较聚的话说明片子处理的好。b.贴片子的时候，展片的时间要把握好，不要太长，否则不利于贴牢。c.烤片子也

6 回答1757 围观

问免疫荧光实验，阳性细胞数如何计数？

土井挞克树

阳性细胞计数为单位面积下阳性细胞数，你所说的是平均个数，还要计算面积（如1个高倍视野面积是多少平方），个/平方毫米，这样数据才有可比性。imagej可以计数，imagej很强大，很有用，希望大家共同学习，共同提高。

3 回答7265 围观

问蛋白对接Zdock中蛋白过大问题

huarenqiang5

蛋白大分子按以下步骤进行预处理：1 在执行vina分子对接过程中，主要的预处理软件事Autodock tools这个软件，前面我们已经介绍过其安装过程，首先打开这个软件；2 应用该软件打开已经准备好的蛋白分子，注意要放在我们指定的文件夹中；3 对该蛋白分子进行加氢反应；4 选择所有的氢原子，点击OK；5 计算蛋白得电荷；6 然后将蛋白保存为PDB格式就好，这个蛋白分子是已经加氢完毕；7 可以直接替

3 回答2152 围观

问microrna载体构建

loveliufudan

miRNA的前体是一段长链RNA，通常会被Drosha核酸酶和Dicer核酸酶剪切成成熟的miRNA分子。在构建miRNA过表达载体时，需要将miRNA的前体序列插入到适当的载体中，以实现高水平的miRNA表达。在设计前体引物时，需要遵循以下原则：引物长度：miRNA的前体长度一般在100到300nt之间，因此前体引物的长度应该在200到500bp之间，以确保充分覆盖前体序列。引物序列：在设计前体

2 回答863 围观

问cat酶活性计算问题

huarenqiang5

是的，是每个样品的最后一分钟吸光度，建议多次几次然后取平均值这样结果更精准。

3 回答697 围观

问细胞程序性死亡与调节性死亡的区别

sswei

细胞程序性死亡（programmed cell death，PCD）是一种基因指导的细胞自我消亡方式。P程序性细胞死亡的亚型包括细胞凋亡、自噬和坏死性凋亡。调节性细胞死亡涉及效应分子参与的信号级联反应，具有独特的生化特征、形态特征和免疫学后果；其中发生在生理条件下的调节性细胞死亡也被称为程序性细胞死亡(PCD)

3 回答3024 围观

问想请教一下用线虫测过抗氧化相关试剂盒的大佬,你们测定时是怎样取样本进行测定的,是直接将虫子收集超声破碎后取上清进行测定的吗？

晴空a

用组织捣碎机 10000～15000 转/分上下研磨制成 10%组织匀浆。将制备好的 10%匀浆液用普通离心机或低温低速离心机 4000 转/分左右,离心 10～15 分钟，取上清液进行测定。

4 回答617 围观

问这个图换一个表达样式可以怎么画？

sswei

可以做一个硫酸浓度变化反应趋势动画图。

2 回答212 围观

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