实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问实验中用到的buffer的配置详细是什么试剂进行配置，以及蛋白含量和对应磁珠用量的具体比例是什么？

土井挞克树

buffer的配置有很多种方法，可以参考下表

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问WB实验转膜过程中出现以下这种问题？

土井挞克树

可能是存在移位或者重叠，建议不要一起转，分开转就不会这样了。

3 回答1172 围观

问用transwell对巨噬细胞和肺成纤维细胞共培养？

sswei

实验步骤:1、效应细胞接种到transwell小室中，培养24小时。2、靶细胞接种到细胞培养板中，培养24小时。3、过夜培养后，将transwell小室和培养板中的培养液除去，下室加入新的培养液。4、将transwell小室放入细胞培养板中并加入新的培养液，培养48-72小时后进行检测。5、取出transwell小室，吸出细胞培养板中的培养液。6、PBS洗涤细胞培养板两次，4%多聚甲醛固定细胞。7

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问关于荧光定量PCR的Ct值的

huarenqiang5

主要考虑以下几点原因：(1)反应的循环数不够：一般要在35个循环以上，但是过多的循环次数可增加背景值。(2)检测荧光信号的步骤有误：SYB-Rgreen法（SG法）采用的是72延伸时采集荧光信号，Taman法则是在退火结束或延伸结束时进行信号采集。(3)引物或探针降解: 可通过PAGE电泳检测其完整性，若是电泳条带呈弥散状，可考虑重新合成引物或探针。(4)模板量不足: 对未知浓度的样品应从系列稀释

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问FITC-Dextran做抗原吞噬细胞的原理是什么呀

土井挞克树

FITC-Dextran具有抗原呈递功能，还可以被特异性识别。

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问有哪些数据库记载了IG基因家族的详细分类分类与功能？

土井挞克树

IMGT，国际免疫遗传学数据库，这个数据库可以查询

3 回答523 围观

问病毒与含有抗体的血清孵育后病毒浓度增高是为什么？

sswei

该病毒抗体的对病毒效力低下或无效，可能抗体失效或抗体效力减弱。

3 回答300 围观

问正常C57小鼠的子宫重量是多少呢?

huarenqiang5

5周龄约重10-20mg，10周龄的约重23-30mg。

3 回答1879 围观

问WB条带中间空白，两边有信号，是什么原因呢

huarenqiang5

wb条带中间有空白的原因是过高的蛋白上样量或一抗和二抗浓度过高都会促使底物过快的消耗导致。

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问为什么紫外分光光度法透光率会上升？

sswei

可能存在环境温度异常，强的照明或不稳定环境下工作等情况。

4 回答593 围观

问根系泌氧（rol）具体测定方法

sswei

柠檬酸钛液体的制备方法，包括以下步骤：S1.烧杯中加入蒸馏水，将柠檬酸倒入烧杯中，并同时搅拌，至柠檬酸完全溶解，再向该溶液中滴加四氯化钛盐酸溶液，同时搅拌，保持烧杯内的温度在25℃，连续搅拌20分钟；S2.向S1中的烧杯内加入氯化铁，搅拌2分钟后加入氯化锌，再次搅拌2分钟后加入二氧化锰，再搅拌2分钟后加入硼酸，搅拌2分钟；S3.向配置好的溶液内缓慢加入乙醇，搅拌，不定时的使用pH剂检测溶液的

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问小鼠蔗糖饮水实验瓶子漏水怎么办呀

sswei

糖水偏好测试过程中偶尔会存在饮水瓶漏水的现象，这种情况有可能是实验员操作失误，有可能是饮水瓶位置放置不正确，也有可能是动物舔水过程中无意泄漏的，这些现象很多时候可能会导致在规定时间内获取的动物舔水摄入量差异不明显（动物单次饮水量本就很有限），这个时候用户可以选择糖水偏好测试仪的计算出的动物舔水次数、饮水时间、舔水频率等数据来参考统计，或许是另一条评估的好思路。最重要的是在正常实验前一定要检查好水瓶

4 回答732 围观

问4T1细胞培养，培养瓶内不明区域性黑点，会影响细胞吗？求助！

dxy_8qhx1717

可能是黑胶虫，数量少对细胞影响不大，数量多会使细胞状态极差，不能用于后续实验。黑胶虫一般产生的原因，可能是环境污染，或者试剂污染，或者培养基血清污染。黑胶虫一般极难去除，一旦发现可能会影响整个细胞培养系统，建议全面消毒细胞实验室，购买新细胞。

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问求问大鼠CD4+T细胞体外培养必须用人白介素2吗，大鼠白介素2行不行，一般具体加多少呢？

sswei

4 回答467 围观

问细胞骨架免疫荧光染色分析细胞迁移问题

huarenqiang5

不能用这种方法比较实验组和对照组的细胞迁移能力。

3 回答362 围观

问免疫荧光实验，ubiquitin 显现不是很明显，是什么原因呢？

dxyc42u

与抗体孵育时间有很大关系，可以尝试晚点看荧光

5 回答315 围观

问如何使用细胞回收液从基质胶上提取细胞

土井挞克树

把细胞回收液收取后先分离纯化后再放到基质胶提取。

3 回答2639 围观

问求助胚胎免疫荧光问题？

huarenqiang5

是的，为了实验结果准确建议提前去除透明带。

4 回答605 围观

问在实验中，特别是在修复后切片容易脱片，切片脱片的原因是什么？

申东熙老伯

切片脱片可能是抗原修复时未等待修复液完全恢复到室温就封闭或者抗原修复时在修复液离泡太久。

4 回答640 围观

问求助：丽春红染色结果一片红没有条带

松鼠的果仁

背景太红了，在去离子水里涮几下

4 回答2128 围观

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