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        硫酸铵沉淀

        相关实验:沉淀 DNA 的实验

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        dxy_dbrk2yd5

        硫酸铵沉淀细菌上清蛋白,80%浓度,一点点的加,4°过夜后离心去上清,用buffer重悬跑wb,但是条带飘的特别厉害,不知道怎么回事图片描述

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        3 个回答

        user-title

        weiran0928

        有帮助

        看样子可能是盐浓度过高导致的。这里的80%是指饱和硫酸铵的80%浓度吗,也就是终浓度3.2M?这个浓度是比较高的,建议做个硫酸铵沉淀的浓度梯度,用更小的浓度沉淀更好。一般来说,50%以上差不多就够了。要么就减少上样量。

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        土井挞克树

        有帮助

        可以延长沉淀时间再跑,然后要控制好体系的ph

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        loveliufudan

        有帮助

        根据您提供的信息,可能是以下原因导致您的WB出现条带飘移的问题:

        蛋白质含量过低:硫酸铵沉淀是蛋白质富集的方法之一,但如果您的起始样品中蛋白质含量过低,那么即使使用浓缩缓冲液,您也可能无法获得足够的蛋白质量。这会导致在Western blotting中出现条带飘移的问题。您可以尝试增加起始样品中的蛋白质含量,或者尝试使用其他富集蛋白质的方法。

        沉淀和洗涤不彻底:硫酸铵沉淀后,需要进行洗涤步骤以去除盐类和其他杂质。如果洗涤不彻底,残留的盐类和其他杂质可能会干扰Western blotting的结果,导致条带飘移。建议您在沉淀和洗涤的过程中,尽可能去除所有的盐类和杂质。

        缓冲液pH值不当:缓冲液的pH值对于蛋白质的稳定性和电荷状态非常重要。如果您的缓冲液pH值不当,蛋白质可能会在Western blotting过程中失去稳定性,导致条带飘移。建议您检查您使用的缓冲液pH值是否正确,并根据需要进行调整。

        过度稀释:如果您的样品太过稀释,那么在Western blotting中可能会出现条带飘移的问题。建议您尝试在Western blotting中使用更浓缩的样品,或者尝试调整Western blotting的条件,以获得更清晰的条带。

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