实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问求助：WesternBlot数据均一化时可以以阳性对照组为一吗

balalaLy

也是可以的，得看你怎么说明解释。

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问求问 qpcr这种曲线到底是什么问题呢

土井挞克树

纵坐标设置太紧凑，区别无法直观观察

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问肝癌细胞HE染色

土井挞克树

糊可能是脱水过度或者固定时间过长，可以减少相应操作时间

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问B16F10-Luc细胞这个样子是状态不好吗？还是污染了？传了两代的细胞，换个液就变这样了

土井挞克树

考虑是杂质污染了，可以加抗生素再观察观察

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问做重组蛋白，构建质粒（无his-tag）

sswei

通过设计引物，添加his-tag，克隆到质粒中去。

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问H&E染色的图片该怎么看？

sswei

细胞损伤分为可逆性改变与不可逆性改变两类。1、可逆性改变包括：细胞水肿、脂肪变、玻璃样变、黏液样变、病理性色素沉着；2、不可逆性改变即坏死，其基本病变为：核固缩、核碎裂、核溶解。据此，该图不能完全判断为细胞损伤，理解错误。

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问小鼠肺组织

sswei

胶原酶Ⅳ包含至少7种蛋白酶成分，分子量从68-130KD不等。它能消化多种组织。胶原酶的使用浓度一般为0.1- 5mg/ml，消化过程中可以搅拌以促进酶的消化。胶原酶在消化的过程中可以引起细胞的少量死亡，一般消化时间为15min至数小时。如果浓度发生变化那么消化时间可能更长。消化过程中首选的缓冲液为含钙离子和BSA的Krebs Ringer Buffer。在消化的过程中如果细胞大量死亡则需要降低酶

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问一个公认的抑癌基因，但是在某个癌中高表达，并且表达越高预后越差

loveliufudan

这种情况通常可以解释为在不同类型的肿瘤中，同一个基因可能会发挥不同的作用。在正常组织中，这个基因可能发挥抑癌的作用，但在某些特定类型的癌症中，由于其他基因的改变或某些环境因素的影响，这个基因的功能可能被转化为促进肿瘤发展。另外，有些基因的表达可能会在不同的肿瘤类型中表现出差异，因此这个基因在某个癌症中的表达水平高，并不一定代表它在其他类型的癌症中也会高表达。此外，一些研究还表明，在某些情况下，高表

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问伊红染色测定精子畸形率中的去组织碎片是什么意思？

loveliufudan

在伊红染色前，需要将附睾组织去除，只留下精子。这个过程中，有可能会有组织碎片残留在精子混悬液中。这些组织碎片会影响对精子形态的观察和计数。因此，在用明移液枪吹打精子混悬液时，可以轻轻吹打，以去除残留的组织碎片，这就是所谓的去组织碎片。

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问小鼠原始cd4细胞体外分化th17

sswei

人和小鼠TGF-β1的同源性高达99%，表明在不同种属中TGF-β都具有重要的生物学功能。所以两者均可以用。

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问请问怎样分离和提纯Igf2呀

sswei

采用层析色谱结合生化提取的方法。

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问求助关于Jurkat细胞的问题。

sswei

Jurkat细胞如果用慢病毒做成car-t，不具有永生能力。如果用慢病毒转染，转染前可使用CD3/CD28抗体进行激活。慢病毒转染后，可以对肿瘤细胞进行杀伤，CD4比CD8的杀伤作用差些。

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问电感耦合等离子质谱仪

sswei

粉末/块状样品一般提供100mg以上。

3 回答482 围观

问标准偏差

sswei

N指调查统计中的样本总数。n指调查统计中的样本个数。

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问求助‖真菌鉴定，除了ITS还可以用什么呢

sswei

真菌检查的方法包括直接镜检、真菌培养、血清学试验、组织病理检查等，最常用的就是真菌的直接镜检。真菌的直接镜检需要使用酒精清洁创面，可以收取表面的皮屑、毛发、甲板或者体液组织等。将收取的标本放在玻璃片上，加5%-10%的氢氧化钾液，盖上盖玻片，溶解一会儿，一般5分钟后可以在显微镜下低倍镜下寻找有无菌丝或者孢子，寻找到菌丝或者孢子后可以转为高倍镜进行观察。其他还有通过筛子检验，比重检验法，染色检验法，

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问大家知道Cancer Immunology Research的投稿周期嘛感谢

huarenqiang5

审稿周期一般是一个月左右，可以投。

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问请问EdU和Ki67做免疫荧光染色，怎么同时染

sswei

EDU是一种新型的非放射性同位素细胞增殖检测的方法，在细胞培养、实体组织及临床研究中得到了广泛的应用。该技术可用于细胞成像、流式、细胞示踪、DNA损伤修复检测、线粒体活性检测以及病毒增殖活性检测等，EdU亦适用于活体注射。与传统的免疫荧光染色检测方法相比，EdU检测法更简单、更快速、更准确，不需要严苛的样品变性(酸解、热解、酶解)处理，有效地避免了样品损伤，有助于在组织、器官的整体水平上观测细胞增

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问请问哪位大神有肠道HE染色的protocol？🙏

loveliufudan

以下是一般肠道HE染色的protocol，供参考：材料：1.肠道组织切片2.1%硫酸铁溶液3.0.5%氯化钡溶液4.酒精：70%、90%、95%和100%5.苏木精染色液6.伊红染色液7.脱水剂：丙酮和xylene8.封片剂步骤：1.将切片放入1%硫酸铁溶液中，浸泡5分钟，去除多余的溶液。2.将切片放入0.5%氯化钡溶液中，浸泡2-3分钟，去除多余的溶液。3.将切片置于70%乙醇中，浸泡5分钟，然

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问GPCR抗体药物的blocking实验

sswei

流式细胞术检测比放射性元素检查的灵敏度差，准确性低。

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问A549 划痕实验

墨幽染染

划痕实验很重要的一个因素就是铺板量，不同细胞的大小不一样，铺板量不一样。就像786-O细胞比较大，96孔板一般铺2-3万细胞/每孔，第二天细胞融合度达到90%以上；而RKO细胞比较小，96孔板一般需要铺7-8万/每孔，第二天细胞融合度差不多达到90%左右。所以具体要根据细胞大小适当调整，细胞划痕铺板密度一般为70-90%之间。密度过低，增殖因素可能会影响迁移能力，反之，对于细胞状态会有影响，以至于

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