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        二次pcr

        相关实验:反向 PCR (inverse-PCR)

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        林木木木木林

        想请教一下各位老师,第一轮pcr条带很暗,用第一轮产物二次pcr为什么一片模糊呀。我把产物稀释了5-10-20-50-100倍都是一片模糊。

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        3 个回答

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        可能有多种原因导致PCR产物暗或者模糊。以下是一些可能的原因和解决方法:

        反应条件不正确。确保PCR反应体系中的所有试剂品质良好,反应条件正确。如果反应体系中某些试剂的质量差,可以尝试使用新的试剂来重新制备反应体系,如果条件不正确,则可以调整反应温度、时间和引物浓度等参数。

        降解的DNA模板。如果模板的质量不好,例如DNA受到过度酶解、酸碱条件不佳等等,可能会导致PCR产物的低浓度或者失真。可以尝试使用新的DNA模板,或者将反应温度和时间稍微调低一些。

        引物设计不合理。如果引物的设计不合理,可能会导致PCR产物的低浓度或者失真。可以尝试重新设计引物或者更换现有的引物。确保引物能够扩增目标序列并且不与其他区域杂交。

        稀释不合适。如果稀释系数太高或太低,可能会导致PCR产物的低浓度或者失真。可以尝试重新制备PCR产物的稀释系数,并确保在正确的量程内分别测量和分析稀释的PCR产物。

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        考虑有降解,第一次的pcr存在降解所以条带很模糊

        user-title

        相似又互补

        有帮助

        第一轮的产物你在提纯过程中,是不是没有提好?

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