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        荧光定量NTC有峰值

        相关实验:实时荧光定量 PCR(realtime PCR)

        user-title

        迷雾微微凉

        下面都是NTC阴性对照的结果

        第一张图是目的基因的熔解曲线图,cq值大于30,但小于35

        第二张是内参的溶解曲线图,熔解曲线峰值和cq纸值都跟加模板跑出来的差不多

        请问大佬们问题到底是什么啊(用核酸清除剂试过,问题没有改善)图片描述图片描述

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        3 个回答

        user-title

        sswei

        有帮助

        反应体系组分(如,水)被污染:实验过程中,更换新的Mix或者水重复实验;

        标本间的交叉污染或产物污染:反应体系在超净工作台内配制,对实验室进行严格的区分,减少气溶胶污染;使用带滤芯的枪头。

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        荧光定量PCR的NTC (no template control)中出现峰值通常表示存在污染或假阳性。由于NTC没有加入模板,因此假阳性可能来自试剂、仪器或实验者等因素。

        为了确定峰值来源,可以尝试以下几个步骤:

        重复实验:重复进行NTC实验,观察是否有相同的峰值出现,如果没有,则可能是偶然的污染或仪器的误差。

        检查实验条件:检查PCR反应中使用的所有试剂,包括引物、探针、酶、缓冲液等,是否有任何存在污染的可能。此外,检查反应液的配制是否正确,是否有气泡或沉淀等异常。

        检查实验过程:检查实验者操作是否规范,是否存在污染的可能。建议实验者戴手套、使用滤器等措施来减少污染。

        检查仪器:检查仪器是否需要进行维护或校准。有时仪器内部的部件或传感器可能需要清洗或更换。

        重新设计引物和探针:如果以上措施均无法解决问题,建议重新设计引物和探针,避免非特异性扩增。

        最后,建议在实验中始终包括阳性对照和内参对照,以确保实验的准确性。

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        考虑体系内有污染,有异常的杂质污染,建议去除杂质

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