实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问求教！生孢梭菌活性

土井挞克树

传代时细菌密度要合适，过多过少都不好，其次要给细菌适应时间，适应期后再进行实验

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问胶体金产品重复性差

loveliufudan

以下是一些可能导致该问题的原因和相应的解决方法：样本处理：样本的处理可能会影响到检测结果。例如，样本的存储和处理时间可能会影响抗原的稳定性和抗体的活性。为了避免这种情况，应该标准化样本的处理和存储方法，并尽量在相同的时间段内进行检测。试剂问题：试剂的质量和使用方法可能会影响检测结果。例如，过期的试剂可能会影响结果的准确性。此外，如果使用的是不同批次的试剂，可能会存在批次之间的差异。为了解决这个问题

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问求助|植物脱毒苗扩繁，这样子算外部染菌还是内部内生菌没有清除干净😭

土井挞克树

考虑是内生菌侵染所导致的，建议扩繁前杀菌

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问IL-6，IL-1β，TNF-α，IL-17请问大神们这些炎症因子有无对应的aptamer？

loveliufudan

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问水迷宫小鼠活动非理想状态。

土井挞克树

可能是动物和水池大小不匹配过小的水池使动物爬上平台的偶然性增加，任务难度减小。过大的水池则会增加游泳路径，体力消耗过大，爬上站台的概率减少。推荐水池大小:大鼠180cm，小鼠120cm。

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问平板上的放线菌能在4℃冰箱里存活多久？

loveliufudan

在4°C冰箱中存放放线菌，其存活时间会因不同的菌株和存储条件而异。一般而言，放线菌的存活时间在几个月至一年左右。具体时间还要视实验条件而定。为了保证放线菌的质量和存活率，建议将其储存于适当的冷冻保存介质中，如甘油、DMSO等，并在-80°C的冰箱中保存。这样可以保证放线菌的长期存储和稳定性。

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问麻烦请问一下，有没有哪位大佬知道如何验证铜死亡的存在

loveliufudan

验证铜死亡的存在可以采用多种方法，下面列举几种常用的方法供参考：流式细胞术（Flow Cytometry）：可以通过检测细胞膜的完整性来评估细胞死亡。可以使用fluorescein diacetate (FDA)和propidium iodide (PI)染色来区分活细胞和死亡细胞。细胞在铜离子处理后，细胞膜的完整性会受到损害，从而导致细胞死亡。细胞存活率检测（Cell Viability Ass

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问外源基因进入细胞主要有那些方法？

sswei

不同导入原核受体细胞的方法： ①转化：把以质粒为载体，构建的重组分子导入受体细胞的方法。 ②转导：以噬菌体或真核病毒为载体构建的重组分子导入受体细胞的方法。 ③三亲本杂交：将含有重组DNA分子的供体菌，被转化的受体菌含有辅助菌，在辅助菌作用下，将供体菌导入到受体菌中。不同导入真核受体细胞的方法： ①导入酵母中：对酵母进行转化的两种方法：a.细胞壁在CaCL2或多聚醇作用下，细胞壁具有穿透性，允许外

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问非同源末端连接与细胞衰老的关系

loveliufudan

非同源末端连接（non-homologous end joining，NHEJ）是一种DNA修复机制，主要用于修复DNA双链断裂（DSB）。细胞衰老是指细胞失去生长和分化能力，导致细胞功能的下降。这两个概念看起来没有直接关系，但实际上它们之间存在联系。NHEJ是一种非精准的DNA修复方式，它的修复过程中可能会发生错误的连接或缺失，导致DNA序列的改变或缺失。这种错误的连接或缺失在一定程度上可以导致

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问果蝇杂交实验数据处理方法及参考文献

loveliufudan

以下列举几种常用的数据处理和统计方法：卡方检验：卡方检验是判断杂交后代各种基因型比例是否符合Mendel定律的重要方法。通过计算实验观察值和理论预期值之间的差异，可以确定是否存在显著性差异。方差分析：方差分析是一种用于比较多个样本之间差异的统计方法。在果蝇杂交实验中，可以使用方差分析方法来比较不同品系或实验组之间的显著性差异。t检验：t检验是用于比较两个样本之间差异的常用统计方法。在果蝇杂交实验中

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问质粒在DH5α里长，但在DH10α里不长呢？

土井挞克树

降低庆大霉素和四环素的浓度再培养。

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问求问：顺铂溶解问题

loveliufudan

Sigma品牌的顺铂粉末在溶解后，有时候会出现黄色颗粒沉淀，这是由于顺铂分子的结构和化学性质导致的。在4°C低温下保存，这种沉淀是正常的现象，不会对药效产生影响。在使用前需要将其加热使其完全溶解，一般可以使用37°C水浴锅或者将溶剂加热至50-60°C进行溶解。在加热过程中，尽量避免过高的温度或过长的时间，以免影响顺铂的稳定性和活性。需要注意的是，在顺铂的使用过程中，还需要遵守相关的安全操作规范，

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问求教奇奇怪怪的WB

sswei

有以下几点原因：①预处理时未将膜完全均匀地浸透PVDF膜使用前要用100%甲醇浸透膜；有些NC膜需要甲醇浸湿，而有些NC膜不需要甲醇处理，只需要用转膜buffer浸透，具体根据所购买的NC膜说明书操作。②靶蛋白等电点等于或接近转移缓冲液pH值可尝试使用其他缓冲液如CAPS缓冲液(pH10.5)或使用低pH值缓冲液如乙酸缓冲液。③甲醇浓度过高过高甲醇浓度会导致蛋白质与SDS分离，从而沉淀在凝胶中，同

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问求助！亚致死浓度到底是哪个区间的浓度？

土井挞克树

亚致死浓度是指在LC10-LC30这个区间的浓度，这个区间的浓度不会直接致死，但是存在累积效应的时候会致死一部分。

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问求助，ELISA试剂配置怎样操作能够充分混匀啊？

z流沙z

如果是管子可以涡旋振荡，如果是瓶子可以上下颠倒混匀，一孔有值一孔没值，一般是加样问题，加样后用枪头轻柔混匀，或者轻轻拍打侧壁

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问800MS曝光以后看到背景很杂连对照也有杂背景，红框的是对照，这是什么原因呢？

z流沙z

这还算可以，主要就是抗体的非特异性结合。可以延长封闭时间，室温2-3h，另外抗体可以用5%BSA或者脱脂牛奶来配制

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问有没有做个磷酸化的大神遇到过这种情况呢？只出来两三个组，同一批蛋白同个牌子的一抗，另一个指标能出来，这个指标只能出来一俩个组

z流沙z

首先有存在条带，证明整个实验基本上没有问题。至于条带弱或者有的没有条带，有可能是刺激因素不够导致蛋白没有发生磷酸化，也有可能是蛋白上样量不够导致没有显现出来，因为看着背景也比较脏，可以增加上样量和抗体浓度，注意用BSA封闭

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问石蜡免疫荧光

sswei

可能存在切片上的石蜡残留，若血清质量不好，里面可能含有纤维蛋白原(正常血清是不含有纤维蛋白原的)，一旦沾到组织上，基本洗不掉了，也会增强自发荧光信号等情况。

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问蛋白质与糖学

z流沙z

纯化的目的是提纯，过程中会有损失，如果还有浓缩的话可能量会增多

3 回答323 围观

问回收试验

z流沙z

细菌在培养基中能否繁殖，从而扩增质粒，质粒加到培养基中是没有效果的

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