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        WB结果出现目的蛋白很浅,但actin位点或者Gapdh位点出现很深的条带,什么原因呢

        相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

        user-title

        dxy_7d4tlk84

        曝5s只有Gapdh的深条带和目的蛋白的浅条带,下图是拉伸后的样子,圈出来的是目的位点,两边都是显色marker图片描述

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        4 个回答

        user-title

        秋秋欣欣

        有帮助

        有可能内参荧光太强会遮盖目的荧光

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        可能有以下原因:

        抗体效应:可能是由于目的蛋白的抗体效应不好,导致信号较弱。另外,由于抗体的特异性,不同的抗体对于不同的目的蛋白有不同的敏感性,也可能导致不同目的蛋白信号的差异。

        表达量问题:不同蛋白在细胞中的表达量不同,如果目的蛋白的表达量较低,可能会导致信号较弱。

        饱和度问题:如果目的蛋白的表达量过高,可能会导致抗体的饱和度过高,从而导致信号饱和,不能很好地检测出目的蛋白。

        针对这些问题,可以考虑以下解决方案:

        对于抗体效应问题,可以尝试更换其他的抗体或者优化抗体染色的条件。

        对于表达量问题,可以尝试优化细胞培养条件或者提高蛋白表达的浓度,从而增加目的蛋白的表达量。

        对于饱和度问题,可以尝试调整抗体染色的浓度或者时间,从而控制饱和度。

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        我之前也这样 然后换了膜的密度 从0.22换成0.45了 封闭时间延长到1h 洗膜时间也延长到30min 膜激活了1分半  效果就好多了

        user-title

        balalaLy

        有帮助

        非目的条带位置的条带太亮是会影响目的条带的亮度的,建议先敷目的条带,再敷内参

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