日月弓草长
做免疫荧光的时候,染的目的蛋白没显出来,而曝出来的亮点恰恰和DAPI所在的位置和表达是一模一样的,就是仅仅DAPI的蓝色变成了红色而已,和想要的目的蛋白完全不一样,请问这是什么原因呢?感谢各位!!!
loveliufudan
这可能是以下原因:
抗体结合不充分:可能是由于抗体结合的时间不足或者抗体浓度过低,导致目的蛋白无法被充分地染色。
染色过程中存在干扰物:可能是由于样本中存在过多的背景信号或者自发荧光等干扰物,导致目的蛋白的信号被掩盖或者被稀释。
光学仪器问题:可能是由于显微镜或者相机的灵敏度、对比度或者曝光时间等参数设置不当,导致目的蛋白的信号被掩盖或者无法被检测到。
针对这些问题,可以考虑以下解决方案:
优化抗体结合条件:可以尝试调整抗体结合的时间和抗体浓度,以充分地染色目的蛋白。同时,也可以尝试使用其他品牌或者更加特异性的抗体。
优化样本处理和染色条件:可以尝试对样本进行更加彻底的洗涤和处理,以减少干扰物的存在。此外,可以尝试优化染色的条件和使用其他的荧光探针。
调整光学仪器参数:可以尝试调整显微镜或者相机的参数,以增强目的蛋白的信号。另外,也可以考虑使用更加敏感和高分辨率的显微镜或者相机。
土井挞克树
这种情况出现后,首先要检查一下抗体对不对,是否适用于你的预处理组织。有些抗体只适用于冰冻切片,但若将其应用于石蜡切片,就会造成目的蛋白染色不佳的现象。
balalaLy
你可以咨询一下显微镜的工程师看看是不是存在串色的问题,如果不是串色那就应该是你的目的蛋白的阳性染色
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