实验问答

22,710,548 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

全部

细胞

问乳腺癌细胞支原体怎么pcr检测呀？求详细试验方法

土井挞克树

为了准确判断细胞是否有支原体的污染，待测的细胞培养液样品需要取自换液后培养2-3天且汇合度在90%左右的细胞培养液上清（贴壁细胞）。悬浮培养的细胞也需要在换液传代后，让细胞生长2-3天再取培养液进行检测

2 回答387 围观

问补实验的时候，以及想把同一材料的多个基因的表达放一张图，以看出来趋势的时候，如何进行板间校正？

土井挞克树

可以用image做板间校正，把所有结果放在一张图上

3 回答1068 围观

问如果RNA提取浓度太低（甚至达不到逆转要求的量）的情况下，定量是不是只能靠cDNA浓度？

土井挞克树

如果rna浓度太低，可以靠cdna进行定量，但如果二者浓度差异太大，结果误差也会增高。

4 回答1615 围观

问同一个样本做同一个基因，做了两个复孔，但是一个孔溶解曲线的温度是81.5，另外一个孔是81度，这是为什么呢？（溶解曲线都是单峰）

土井挞克树

设置的问题，溶解会有不同的温度设置，温度设置差异结果就会有差异，但是相差0.5是可以接受的

3 回答768 围观

问qPCR每次做结果都不一样，大多时候各组没有差异，怀疑QPCR不准

土井挞克树

先检查体系是否有降解，每次都不一致的话最可能的就是体系存在降解问题。

4 回答1634 围观

问加完样本不立即上机，冻-20℃过夜可以吗？

土井挞克树

过夜的话样品很容易降解，建议尽快上机

4 回答1352 围观

问用质粒做qPCR的时候，低浓度的不同稀释倍数质粒（1undefined4-1undefined1copies/ul）CT值结果很接近，是质粒稀释的问题吗？要

土井挞克树

考虑质粒本身浓度太低，所以稀释后ct值拉不开，很接近。

4 回答1512 围观

问内参相差1个ct值的结果可以用吗？内参相差多少的结果可以用？如果内参差别比较大样品要如何处理呢？

土井挞克树

差一个ct值是可以用的，如果差的大就需要重新稀释cdna

4 回答3357 围观

问外周血PBMC提取RNA的技巧(怎么保证提取过程中RNA不被降解)

土井挞克树

减少污染和高温，可以加入稳定剂。

4 回答2430 围观

问qPCR需要保证每个样本的CDNA浓度一致吗？

土井挞克树

不需要完全一致，保持稀释倍数一致很重要

4 回答5004 围观

问直接提取并检测dna的话引物设计有哪些注意的点?和那种mRNA逆转录成cDNA再进行检测所使用的引物以及设计过程是一样的吗?

土井挞克树

直接提取的话引物需要处理，比如把不翻译的修饰部分去掉。

4 回答450 围观

问新医学杂志审稿流程是什么样的

sswei

一般定稿后就录用了，可能杂志社忙，耐心等待。

3 回答164 围观

问提的骨髓间充质干细胞是污染了嘛

sswei

有几种情况会导致这个现象：1、血清中的絮状物，这个很好排查，如果是预混的培养基，用一个24孔板，不用种细胞，直接注入培养基，平行注入12-20个，如果中间有几个孔出现絮状物，可判断来源于血清。这样的情况不用处理，对细胞没啥影响。2、细胞团，如果培养细胞状态不理想，出现凋亡现象，细胞会漂浮很多，再加上换液如果不及时，有时候可以细胞团出现。从镜下视野会见细胞状态不是理想。3、移液器吸头或移液器中的杂质

3 回答690 围观

问重组蛋白表达正常，ELisa检测时阴阳性区分不开是什么原因？

sswei

可能存在PH值选择不当，封闭时其它蛋白的干扰等原因。

3 回答509 围观

问想构建某疾病的角膜上皮细胞模型，本打算用该病病人的血清培养角膜上皮细胞，可想到角膜是无血液的组织，那这种方法还可行吗？

sswei

培养方法:原代培养 1. 将供体角膜放于消毒过的物品上，上皮面朝上，用手术刀切成 12 个三角形组织片。应一刀切下去，避免锯割。如此仔细处理角膜可减少对胶原蛋白基质的破坏和成纤维细胞的脱落。2. 将角膜组组织片的上皮面翻向下，放入用鼠尾 I 型胶原蛋白预涂的 6 孔培养板，每孔放 4 个组织块。3. 用镊子轻压组织片，以便使组织块与培养皿表面充分接触。将组织片放置 20 min，使其变干。4. 将

3 回答318 围观

问如何绘制果蝇胚胎发育的时空图谱，研究果蝇身体分节是如何确定的，以及分节过程中参与的基因开关和梯度信号是什么？

sswei

形态发生素调节首先表达的合子基因（缺口基因）。缺口基因表达区呈带状，带宽约3体节，不同缺口基因表达区之间有部分重叠，他翻译的蛋白质以及浓度效应调控成对控制基因的表达。成对控制基因的带状表达区将胚胎沿前后轴分成周期性单位。它翻译的蛋白质激活体节极性基因转录。体节极性基因表达产物进一步将胚胎分成14体节。同时，缺口基因和成对控制基因的编码蛋白质，以及体节极性基因与同源异型框基因之间的相互作用，调节同源

2 回答450 围观

问cox回归分析

Topmicro

这表示单个因素对结果的影响并不显著，可能需要同时考虑多个因素的影响。多因素cox回归分析可以纳入模型，但必须确保考虑到所有可能的因素并控制其对结果的干扰。这些变量在模型中应该被认为是相互独立的预测因素。

3 回答746 围观

问中和抗体

sswei

这个与抗原的表位有关，有些抗体识别的是线性表位，即抗原变性后的表位，比如WB中的抗原表位是线性表位，有些抗体识别的是空间表位，即抗原的天然结构，可能变性后无法识别。但也有些抗体既能识别线性表位也能识别空间表位，具体的要看抗体说明书上的用途说明。从本质上来看，都是一种抗原抗体的特异性反应，不过中和抗体的反应体系是溶液，WB的抗体是针对固体相上的抗原，要看怎么设计的实验。

3 回答1203 围观

问P38激酶有哪几种？研究通路设计p38激酶，请问有哪几种？

Topmicro

P38是一种蛋白激酶，属于MAPK家族。在哺乳动物细胞中，P38激酶有四种不同的亚型：P38α、P38β、P38γ和P38δ。这些不同的亚型在结构上略有不同，并且它们的表达模式和功能也存在差异。其中，P38α和P38β广泛表达于大多数组织中，而P38γ和P38δ则主要表达于免疫相关组织中，例如淋巴细胞和骨髓细胞等。这些亚型主要通过对底物的磷酸化来调节多种生物学过程，例如起搏者活动、细胞增殖、凋亡、

3 回答575 围观

问胶原酶分种属区别吗

sswei

胶原酶分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型以及肝细胞专用胶原酶，要根据所要分离消化的组织类型选择胶原酶类型。并不分种属区別。胶原酶Ⅰ用于上皮、肺，脂肪和肾上腺组织细胞的分离。用于消化组织中连接部分使其成为单个细胞，用于哺乳动细胞的分离。

3 回答781 围观

关于丁香通

公司信息

个人用户

企业机构

无忧采购轻松科研

提问

扫一扫

实验小助手

扫码领资料

反馈

TOP

打开小程序